Original Title: Development of a Dot-Elisa Assay for Diagnosis of Southern Rice Black-Streaked Dwarf Disease in the Field
Source: doi.org/10.31817/vjas.2020.5.3.05
Disclaimer: Summary generated by AI based on the provided document. Please refer to the original paper for full scientific accuracy.

ការអភិវឌ្ឍវិធីសាស្ត្រវិភាគ Dot-Elisa សម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យជំងឺតឿស្រូវឆ្នូតខ្មៅភាគខាងត្បូងនៅតាមវាលស្រែ

ចំណងជើងដើម៖ Development of a Dot-Elisa Assay for Diagnosis of Southern Rice Black-Streaked Dwarf Disease in the Field

អ្នកនិពន្ធ៖ La Duc Duy (Faculty of Biotechnology, Vietnam National University of Agriculture), Do Thi Hanh (Faculty of Chemical Technology, Hanoi University of Industry), Bui Thi Thu Huong (Faculty of Biotechnology, Vietnam National University of Agriculture), Pham Thu Hang (Department of Molecular Pathology, Agricultural Genetics Institute), Ha Viet Cuong (Faculty of Biotechnology, Vietnam National University of Agriculture), Pham Xuan Hoi (Department of Molecular Pathology, Agricultural Genetics Institute), Dam Quang Hieu (Department of Molecular Pathology, Agricultural Genetics Institute), Nguyen Duy Phuong (Department of Molecular Pathology, Agricultural Genetics Institute)

ឆ្នាំបោះពុម្ព៖ 2022, Vietnam Journal of Agricultural Sciences

វិស័យសិក្សា៖ Plant Pathology

១. សេចក្តីសង្ខេបប្រតិបត្តិ (Executive Summary)

បញ្ហា (The Problem)៖ ឯកសារនេះដោះស្រាយបញ្ហាការខូចខាតដំណាំស្រូវយ៉ាងធ្ងន់ធ្ងរដោយសារវីរុសជំងឺតឿស្រូវឆ្នូតខ្មៅភាគខាងត្បូង (SRBSDV) និងតម្រូវការសម្រាប់វិធីសាស្ត្រធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យនៅតាមវាលស្រែដែលមានតម្លៃថោក និងងាយស្រួលជាងវិធីសាស្ត្រ RT-PCR ដែលមានតម្លៃថ្លៃ។

វិធីសាស្ត្រ (The Methodology)៖ ការសិក្សានេះបានផលិតអង់ទីគ័រប្រឆាំងនឹងវីរុស និងអភិវឌ្ឍវិធីសាស្ត្រវិភាគតាមរយៈប្រតិកម្មភាពស៊ាំសម្រាប់ការធ្វើតេស្តរោគវិនិច្ឆ័យមេរោគលើសំណាកស្រូវ និងសត្វល្អិតចង្រៃ។

លទ្ធផលសំខាន់ៗ (The Verdict)៖

២. ការវិភាគលើប្រសិទ្ធភាព និងដែនកំណត់ (Performance & Constraints)

វិធីសាស្ត្រ (Method) គុណសម្បត្តិ (Pros) គុណវិបត្តិ (Cons) លទ្ធផលគន្លឹះ (Key Result)
RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)
វិធីសាស្ត្រ RT-PCR (ប្រតិកម្មច្រវាក់ Polymerase ចម្លងបញ្ច្រាស)
មានភាពត្រឹមត្រូវខ្ពស់បំផុត និងអាចរកឃើញមេរោគក្នុងកម្រិតទាប។ ត្រូវបានប្រើប្រាស់ជាវិធីសាស្ត្រស្តង់ដារសម្រាប់ផ្ទៀងផ្ទាត់លទ្ធផល។ មានតម្លៃថ្លៃ ទាមទារសារធាតុគីមី និងឧបករណ៍ទំនើបៗ ព្រមទាំងអ្នកបច្ចេកទេសជំនាញដែលពិបាកអនុវត្តនៅតាមវាលស្រែ។ ប្រើជាស្តង់ដារគោល (១០០%) សម្រាប់វាយតម្លៃកម្រិតភាពត្រឹមត្រូវនៃវិធីសាស្ត្រផ្សេងទៀត។
Dot-ELISA (Dot-Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
វិធីសាស្ត្រ Dot-ELISA ប្រើប្រាស់អង់ទីគ័រ anti-P10
ចំណាយតិច ងាយស្រួល អាចធ្វើតេស្តសំណាកច្រើនក្នុងពេលតែមួយ និងស័ក្តិសមសម្រាប់ការប្រើប្រាស់នៅតាមវាលស្រែ ឬមន្ទីរពិសោធន៍ខ្នាតតូច។ ទាមទារការបន្សុទ្ធអង់ទីគ័រឱ្យបានល្អ ហើយលទ្ធផលអាចរងឥទ្ធិពលខ្លះៗពីសារធាតុក្លរ៉ូហ្វីល (chlorophyll) នៅក្នុងស្លឹកស្រូវ។ មានអត្រាភាពត្រឹមត្រូវជាមធ្យម ៩០.៩% បើប្រៀបធៀបជាមួយ RT-PCR។
Quick-stick test
តេស្តរហ័ស (Quick-stick test / ឧបករណ៍ធ្វើតេស្តរហ័ស)
ងាយស្រួលប្រើប្រាស់បំផុត មិនត្រូវការឧបករណ៍ស្មុគស្មាញ និងផ្តល់លទ្ធផលលឿនសម្រាប់ការវិភាគបឋមនៅតាមវាលស្រែ។ ភាពត្រឹមត្រូវមានការប្រែប្រួល និងទាបជាងការប្រើ Dot-ELISA ជាពិសេសសម្រាប់ការធ្វើតេស្តលើសត្វល្អិតមមាចខ្នងស។ មានអត្រាភាពត្រឹមត្រូវជាមធ្យមប្រមាណ ៨៩.៧% ទៅ ៩៤.១% លើស្រូវ និង ៨២.៥% ទៅ ៨៧.៥% លើសត្វល្អិតមមាច។

ការចំណាយលើធនធាន (Resource Cost)៖ ការប្រើប្រាស់វិធីសាស្ត្រ Dot-ELISA ទាមទារធនធានតិច និងមានតម្លៃថោកជាងបើប្រៀបធៀបទៅនឹង RT-PCR ដែលស័ក្តិសមខ្លាំងសម្រាប់ប្រទេសកំពុងអភិវឌ្ឍន៍។

៣. ការពិនិត្យសម្រាប់បរិបទកម្ពុជា/អាស៊ីអាគ្នេយ៍

ភាពលំអៀងនៃទិន្នន័យ (Data Bias)៖

ការសិក្សានេះត្រូវបានធ្វើឡើងនៅក្នុងប្រទេសវៀតណាម (ភាគខាងជើង និងកណ្តាល) ដោយប្រើប្រាស់សំណាកស្រូវ និងសត្វល្អិតមមាចខ្នងស (WBPH) ពីតំបន់នោះដោយផ្ទាល់។ ទោះបីជាអាកាសធាតុ និងបរិស្ថានកសិកម្មមានភាពស្រដៀងគ្នានឹងប្រទេសកម្ពុជាក៏ដោយ ប៉ុន្តែភាពត្រឹមត្រូវនៃអង់ទីគ័រអាចមានការប្រែប្រួលបន្តិចបន្តួចអាស្រ័យលើប្រភេទពូជមេរោគ (viral strain) ដែលមានវត្តមាននៅកម្ពុជា ហេតុនេះការធ្វើតេស្តសុពលភាពឡើងវិញលើសំណាកក្នុងស្រុកគឺជារឿងចាំបាច់។

លទ្ធភាពនៃការអនុវត្ត (Applicability)៖

វិធីសាស្ត្រ Dot-ELISA នេះមានសក្តានុពល និងអត្ថប្រយោជន៍ខ្ពស់បំផុតសម្រាប់ការអនុវត្តជាក់ស្តែងក្នុងវិស័យកសិកម្មនៅប្រទេសកម្ពុជា ពិសេសសម្រាប់ការចុះពិនិត្យតាមវាលស្រែ។

ការដាក់បញ្ចូលវិធីសាស្ត្រ Dot-ELISA ជាឧបករណ៍ធ្វើតេស្តរោគវិនិច្ឆ័យនៅតាមខេត្ត នឹងពង្រឹងសមត្ថភាពរបស់កម្ពុជាយ៉ាងខ្លាំង ក្នុងការគ្រប់គ្រង និងឆ្លើយតបយ៉ាងឆាប់រហ័សចំពោះការផ្ទុះឡើងនៃជំងឺវីរុសលើដំណាំស្រូវ។

៤. ផែនការសកម្មភាពសម្រាប់និស្សិត (Actionable Roadmap)

ដើម្បីអនុវត្តតាមការសិក្សានេះ និស្សិតគួរអនុវត្តតាមជំហានខាងក្រោម៖

  1. សិក្សាពីមូលដ្ឋានជីវសាស្ត្រនៃវីរុស SRBSDV: និស្សិតគួរស្វែងយល់ពីទម្រង់ និងលក្ខណៈនៃប្រូតេអ៊ីនរុំព័ទ្ធវីរុស P10 រួមទាំងយន្តការនៃការចម្លងមេរោគតាមរយៈសត្វល្អិតមមាចខ្នងស (WBPH) ដោយប្រើប្រាស់ឯកសារស្រាវជ្រាវពី NCBI PubMedGoogle Scholar
  2. ស្វែងយល់ពីគោលការណ៍ Dot-ELISA និង Western Blot: សិក្សាអំពីទ្រឹស្តីនៃប្រតិកម្មភាពស៊ាំ (antigen-antibody interaction) និងអនុវត្តនីតិវិធីនៃការរៀបចំ PVDF membrane ការប្រើប្រាស់អង់ទីគ័រ និងការដាក់ពណ៌ដើម្បីរកឃើញប្រូតេអ៊ីនគោលដៅ។
  3. ហ្វឹកហាត់ការចម្រាញ់ប្រូតេអ៊ីនពីសំណាករុក្ខជាតិ: អនុវត្តផ្ទាល់ក្នុងការយកសំណាកស្លឹកស្រូវ និងសត្វល្អិតមកកិនជាមួយ Liquid Nitrogen និង TBS buffer នៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍របស់សាកលវិទ្យាល័យ ដើម្បីស្ទាត់ជំនាញផ្នែករៀបចំសំណាក (Sample Preparation)។
  4. វិភាគទិន្នន័យរូបភាពអាំងតង់ស៊ីតេកម្រិតពណ៌: រៀនប្រើប្រាស់កម្មវិធី ImageJ ដើម្បីវិភាគកម្រិតពណ៌ (color intensity) ពីលទ្ធផល Dot-ELISA ដូចដែលបានអនុវត្តនៅក្នុងការសិក្សា និងធ្វើការប្រៀបធៀបតាមបែបស្ថិតិដោយប្រើ ExcelSPSS
  5. រៀបចំគម្រោងស្រាវជ្រាវសាកល្បងនៅកម្ពុជា: សរសេរសំណើគម្រោង (Research Proposal) ដើម្បីស្នើសុំសហការជាមួយមន្ទីរកសិកម្ម ឬវិទ្យាស្ថាន CARDI ក្នុងការប្រមូលសំណាកសត្វល្អិតពីវាលស្រែក្នុងស្រុក និងធ្វើតេស្តសុពលភាពនៃវិធីសាស្ត្រនេះនៅកម្ពុជា។

៥. វាក្យសព្ទបច្ចេកទេស (Technical Glossary)

ពាក្យបច្ចេកទេស ការពន្យល់ជាខេមរភាសា (Khmer Explanation) និយមន័យសាមញ្ញ (Simple Definition)
Dot-enzyme-linked immunosorbent assay (វិធីសាស្ត្រវិភាគ Dot-ELISA / ប្រតិកម្មភាពស៊ាំលើបន្ទះចំណុច) ជាបច្ចេកទេសមន្ទីរពិសោធន៍ដែលប្រើប្រាស់អង់ទីគ័រដើម្បីចាប់យក និងបញ្ជាក់ពីវត្តមានប្រូតេអ៊ីន ឬមេរោគ ដោយបង្ហាញលទ្ធផលជាចំណុចពណ៌នៅលើបន្ទះក្រដាសពិសេស (PVDF membrane)។ វាមានតម្លៃថោក និងងាយស្រួលអនុវត្តជាងការធ្វើតេស្តរាវ (Liquid ELISA)។ ដូចជាការបន្តក់ទឹកថ្នាំលើក្រដាសដើម្បីរកមើលស្នាមប្រឡាក់ជាក់លាក់មួយ បើមានមេរោគ វានឹងលេចចេញជាចំណុចពណ៌នៅលើក្រដាសនោះ។
Reverse transcription polymerase chain reaction (ប្រតិកម្មច្រវាក់ Polymerase ចម្លងបញ្ច្រាស / RT-PCR) ជាវិធីសាស្ត្រម៉ូលេគុលដ៏សុក្រឹតបំផុតដែលបំប្លែង RNA របស់វីរុសទៅជា DNA រួចធ្វើការថតចម្លង (គុណ) ឱ្យមានចំនួនច្រើនរាប់លានដងដើម្បីងាយស្រួលរកមើល។ វាមានភាពជាក់លាក់ខ្ពស់បំផុត តែទាមទារឧបករណ៍ទំនើប និងអ្នកជំនាញ។ ដូចជាការយកអត្ថបទមួយវគ្គតូចដែលមើលសឹងមិនច្បាស់ ទៅថតចម្លង (copy) បន្ថែមរាប់លានសន្លឹក ដើម្បីឱ្យយើងអាចរកឃើញ និងអានបានយ៉ាងច្បាស់។
Polyclonal antibodies (អង់ទីគ័រពហុក្លូន) ជាបណ្តុំនៃអង់ទីគ័រច្រើនប្រភេទដែលផលិតដោយកោសិកាភាពស៊ាំផ្សេងៗគ្នា ហើយអាចចងភ្ជាប់ទៅនឹងផ្នែកផ្សេងៗគ្នានៃសារធាតុបង្កជំងឺ (Antigen) តែមួយ។ វាជួយបង្កើនសមត្ថភាពក្នុងការរកឃើញមេរោគ។ ដូចជាក្រុមប៉ូលីសជាច្រើននាក់ដែលសហការគ្នាចាប់ចោរតែម្នាក់ ដោយម្នាក់ចាប់ដៃ ម្នាក់ចាប់ជើង និងម្នាក់ទៀតចាប់អាវ ដែលធ្វើឱ្យចោរមិនអាចគេចរួច។
Southern rice black-streaked dwarf virus (វីរុសជំងឺតឿស្រូវឆ្នូតខ្មៅភាគខាងត្បូង / SRBSDV) ជាប្រភេទវីរុសបង្កជំងឺយ៉ាងធ្ងន់ធ្ងរលើដំណាំស្រូវ ដែលធ្វើឱ្យដើមស្រូវក្រិនតឿ និងមានស្នាមឆ្នូតពណ៌ខ្មៅនៅលើដើម ព្រមទាំងមិនអាចបញ្ចេញគួរបាន។ វាឆ្លងរាលដាលយ៉ាងលឿនតាមរយៈសត្វល្អិតមមាច។ ដូចជាជំងឺកង្វះអាហារូបត្ថម្ភនិងមេរោគដែលធ្វើឱ្យក្មេងមិនលូតលាស់ ហើយឡើងស្នាមអុចៗលើស្បែកអញ្ចឹងដែរ ប៉ុន្តែនេះកើតលើដើមស្រូវ។
White-backed planthopper (មមាចខ្នងស / WBPH) ជាប្រភេទសត្វល្អិតចង្រៃជញ្ជក់ទឹកដមរុក្ខជាតិ ដែលដើរតួជាភ្នាក់ងារចម្លង (vector) ចម្បងក្នុងការនាំមេរោគ SRBSDV ពីដើមស្រូវដែលមានជំងឺទៅចម្លងដល់ដើមស្រូវដែលមានសុខភាពល្អ។ ដូចជាសត្វមូសខ្លាដែលបឺតឈាមអ្នកមានជំងឺគ្រុនឈាម រួចហោះទៅចម្លងមេរោគនោះដល់មនុស្សដទៃទៀតដែលជាសព្វដងអញ្ចឹងដែរ។
Recombinant P10 protein (ប្រូតេអ៊ីនកែច្នៃ P10) ជាប្រូតេអ៊ីនសំបករបស់វីរុសដែលត្រូវបានគេបង្កើតឡើង និងផលិតបន្តពូជនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ (តាមរយៈបាក់តេរី E. coli) ដើម្បីចាក់បញ្ចូលទៅក្នុងសត្វកណ្តុរឱ្យបង្កើតអង់ទីគ័រ ដោយមិនចាំបាច់ប្រើប្រាស់វីរុសពិតប្រាកដឡើយ។ ដូចជាការបង្កើតទីងមោងដែលមានរូបរាងដូចចោរ ដើម្បីយកមកបង្ហាត់ឆ្កែឱ្យចេះចាំខាំចោរពិតប្រាកដនៅថ្ងៃក្រោយ។
Western blot (វិធីសាស្ត្រ Western blot) ជាបច្ចេកទេសវិភាគដែលបំបែកប្រូតេអ៊ីនតាមទំហំម៉ូលេគុលរបស់វាដោយប្រើចរន្តអគ្គិសនី រួចផ្ទេរទៅលើបន្ទះ និងប្រើអង់ទីគ័រដើម្បីបញ្ជាក់ពីវត្តមាននៃប្រូតេអ៊ីនគោលដៅជាក់លាក់ណាមួយ (ដូចជាប្រូតេអ៊ីន P10 របស់វីរុស)។ ដូចជាការតម្រៀបសិស្សតាមកម្ពស់ រួចដើររកមើលសិស្សណាដែលពាក់អាវពណ៌ក្រហម (ប្រូតេអ៊ីនគោលដៅ) ដោយប្រើឧបករណ៍ស្កេនពិសេស។
Protein A-agarose affinity chromatography (ការបន្សុទ្ធអង់ទីគ័រដោយក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីភ្ជាប់ Protein A-agarose) ជាបច្ចេកទេសចម្រាញ់យកតែអង់ទីគ័រប្រភេទ IgG ឱ្យបានសុទ្ធល្អពីក្នុងសេរ៉ូមឈាម ដោយប្រើប្រាស់ជ័រ agarose ដែលមានភ្ជាប់ប្រូតេអ៊ីន A សម្រាប់ចាប់យកតែអង់ទីគ័រនោះ រួចលាងជម្រះសារធាតុដែលមិនត្រូវការចេញ។ ដូចជាការប្រើមេដែកដើម្បីស្រូបយកតែកម្ទេចដែកឱ្យបានសុទ្ធ ចេញពីគំនរខ្សាច់ឬដីអញ្ចឹងដែរ។

៦. ប្រធានបទពាក់ព័ន្ធ (Further Reading)

អត្ថបទដែលបានបោះពុម្ពនៅលើ KhmerResearch ដែលទាក់ទងនឹងប្រធានបទនេះ៖

ប្រធានបទ និងសំណួរស្រាវជ្រាវដែលទាក់ទងនឹងឯកសារនេះ ដែលអ្នកអាចស្វែងរកបន្ថែម៖