Original Title: การพัฒนาและตรวจสอบความใช้ได้ของวิธีวิเคราะห์โอคราทอกซิน เอ ในธัญพืชด้วยเทคนิค High Performance Liquid Chromatography - High Resolution Mass Spectrometry
Source: doi.org/10.14456/thaidoa-agres.2020.26
Disclaimer: Summary generated by AI based on the provided document. Please refer to the original paper for full scientific accuracy.

ការអភិវឌ្ឍ និងផ្ទៀងផ្ទាត់សុពលភាពនៃវិធីសាស្រ្តវិភាគ Ochratoxin A ក្នុងធញ្ញជាតិដោយប្រើបច្ចេកទេស High Performance Liquid Chromatography - High Resolution Mass Spectrometry

ចំណងជើងដើម៖ การพัฒนาและตรวจสอบความใช้ได้ของวิธีวิเคราะห์โอคราทอกซิน เอ ในธัญพืชด้วยเทคนิค High Performance Liquid Chromatography - High Resolution Mass Spectrometry

អ្នកនិពន្ធ៖ Thitaporn Rutrin, Adisorn Jettanajit, Ratchanee Ragsattayanan, Kanokwan Ponchim, Taweesak Tongngamdee

ឆ្នាំបោះពុម្ព៖ 2020, Thai Agricultural Research Journal

វិស័យសិក្សា៖ Agricultural Chemistry

១. សេចក្តីសង្ខេបប្រតិបត្តិ (Executive Summary)

បញ្ហា (The Problem)៖ ការស្រាវជ្រាវនេះដោះស្រាយបញ្ហានៃការចម្លងរោគសារធាតុពុល Ochratoxin A ក្នុងផលិតផលកសិកម្ម (ធញ្ញជាតិ) ដែលទាមទារវិធីសាស្ត្រវិភាគដែលមានភាពសុក្រឹតខ្ពស់ ដើម្បីបំពេញតាមស្តង់ដារសុវត្ថិភាពចំណីអាហារអន្តរជាតិសម្រាប់ការនាំចេញ។

វិធីសាស្ត្រ (The Methodology)៖ អ្នកស្រាវជ្រាវបានអភិវឌ្ឍ និងផ្ទៀងផ្ទាត់សុពលភាពវិធីសាស្ត្រវិភាគដោយកែច្នៃពីវិធីសាស្ត្រស្តង់ដារ AOAC 2000.03 ដោយប្រើម៉ាស៊ីន HPLC-HRMS ជំនួសឧបករណ៍ចាស់ដើម្បីបង្កើនភាពជាក់លាក់។

លទ្ធផលសំខាន់ៗ (The Verdict)៖

២. ការវិភាគលើប្រសិទ្ធភាព និងដែនកំណត់ (Performance & Constraints)

វិធីសាស្ត្រ (Method) គុណសម្បត្តិ (Pros) គុណវិបត្តិ (Cons) លទ្ធផលគន្លឹះ (Key Result)
HPLC-FLD (Baseline Method)
បច្ចេកទេស HPLC ប្រើប្រាស់ឧបករណ៍ចាប់សញ្ញា Fluorescence (វិធីសាស្ត្រចាស់)
ជាវិធីសាស្ត្រស្តង់ដារដែលត្រូវបានប្រើប្រាស់ទូទៅកន្លងមកក្នុងការវិភាគសារធាតុពុលក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍។ ចំណាយពេលក្នុងការវិភាគយូរជាង និងមានភាពជាក់លាក់ (Specificity) ទាបជាងបច្ចេកទេស HRMS។ មិនត្រូវបានផ្តោតសំខាន់លើលទ្ធផលវាយតម្លៃក្នុងឯកសារនេះទេ តែត្រូវបានលើកឡើងថាមានភាពជាក់លាក់ទាប។
HPLC-HRMS (Proposed Method)
បច្ចេកទេស HPLC ប្រើប្រាស់ម៉ាស់ស្ប៉ិចត្រូម៉ែត្រកម្រិតច្បាស់ខ្ពស់ (វិធីសាស្ត្រកែច្នៃថ្មី)
មានភាពត្រឹមត្រូវខ្ពស់ ច្បាស់លាស់ ផ្តល់លទ្ធផលលឿន និងមានភាពជាក់លាក់ខ្ពស់ក្នុងការកាត់បន្ថយសារធាតុរំខានផ្សេងៗ ទោះក្នុងកម្រិតកំហាប់ទាប។ ទាមទារឧបករណ៍វិភាគ (HRMS) ដែលមានតម្លៃថ្លៃខ្លាំង និងអ្នកជំនាញបច្ចេកទេសកម្រិតខ្ពស់សម្រាប់ការប្រើប្រាស់ទិន្នន័យម៉ាស់ស្ប៉ិចត្រូម៉ែត្រ។ មានដែនកំណត់រកឃើញ (LOD) ត្រឹម ០,២០ µg/kg និងអត្រាងើបឡើងវិញ (%Recovery) ពី ៧២,៥៤ ដល់ ១១៦,៦០% ព្រមទាំងទទួលបានស្តង់ដារ ISO/IEC 17025។

ការចំណាយលើធនធាន (Resource Cost)៖ ការអនុវត្តវិធីសាស្ត្រនេះទាមទារការវិនិយោគខ្ពស់លើឧបករណ៍មន្ទីរពិសោធន៍ទំនើប សារធាតុគីមីដែលមានភាពបរិសុទ្ធខ្ពស់ និងអ្នកបច្ចេកទេសដែលមានជំនាញច្បាស់លាស់។

៣. ការពិនិត្យសម្រាប់បរិបទកម្ពុជា/អាស៊ីអាគ្នេយ៍

ភាពលំអៀងនៃទិន្នន័យ (Data Bias)៖

ការសិក្សានេះត្រូវបានអនុវត្តនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍នៃប្រទេសថៃ ដោយប្រើប្រាស់គំរូធញ្ញជាតិចម្រុះដូចជា ស្រូវសាលី អង្ករជប៉ុន អង្ករ Basmati និងស្រូវអូត ជាតំណាងក្នុងការធ្វើតេស្ត។ ទិន្នន័យនេះមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ប្រទេសកម្ពុជា ដោយសារកម្ពុជាក៏ជាប្រទេសផលិត និងនាំចេញផលិតផលកសិកម្ម (ជាពិសេសអង្ករ និងពោត) ដែលទាមទារការត្រួតពិនិត្យសារធាតុពុលតិត្ថិភាពពីផ្សិត ស្របតាមស្តង់ដារអន្តរជាតិ និងទីផ្សារសហភាពអឺរ៉ុប។

លទ្ធភាពនៃការអនុវត្ត (Applicability)៖

បច្ចេកទេសនេះមានអត្ថប្រយោជន៍យ៉ាងខ្លាំងសម្រាប់ការពង្រឹងគុណភាព និងសុវត្ថិភាពផលិតផលកសិកម្មនៅកម្ពុជា។

ជារួម ការអភិវឌ្ឍវិធីសាស្ត្រនេះជួយឱ្យកម្ពុជាអាចមានសមត្ថភាពវិភាគកម្រិតខ្ពស់ស្របតាមស្តង់ដារ ISO/IEC 17025 ដែលជាស្ពានក្នុងការធានាការប្រកួតប្រជែងទំនិញនៅលើទីផ្សារអន្តរជាតិ។

៤. ផែនការសកម្មភាពសម្រាប់និស្សិត (Actionable Roadmap)

ដើម្បីអនុវត្តតាមការសិក្សានេះ និស្សិតគួរអនុវត្តតាមជំហានខាងក្រោម៖

  1. សិក្សាមូលដ្ឋានគ្រឹះស្តីពីក្រូម៉ាតូក្រាហ្វី (Chromatography): និស្សិតត្រូវស្វែងយល់ពីគោលការណ៍នៃបច្ចេកទេសវត្ថុរាវ High Performance Liquid Chromatography (HPLC) និងការបែងចែកម៉ូលេគុលម៉ាស់ Mass Spectrometry (MS) តាមរយៈការសិក្សាទ្រឹស្តី ឬចូលរួមវគ្គបណ្តុះបណ្តាលក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍គីមីវិភាគ។
  2. អនុវត្តការរៀបចំគំរូ (Sample Preparation): រៀនពីវិធីសាស្ត្រចម្រាញ់ និងសម្អាតគំរូធញ្ញជាតិដោយប្រើប្រាស់បច្ចេកទេស Immunoaffinity Column (IAC) និងការប្រើប្រាស់សូលុយស្យុងរលាយ (Solvents) ដូចជា Acetonitrile និង Methanol ដើម្បីបំបាត់សារធាតុរំខានចេញពីគំរូ។
  3. ហ្វឹកហាត់លើការផ្ទៀងផ្ទាត់សុពលភាពវិធីសាស្ត្រ (Method Validation): អនុវត្តការគណនា និងរៀបចំទិន្នន័យដើម្បីរកដែនកំណត់រកឃើញ (LOD), ដែនកំណត់បរិមាណ (LOQ), និងអត្រាងើបឡើងវិញ (Recovery rate) ស្របតាមគោលការណ៍ណែនាំស្តង់ដារអន្តរជាតិ (ឧទាហរណ៍ AOAC)។
  4. ប្រើប្រាស់ឧបករណ៍ និងកម្មវិធីវិភាគទិន្នន័យ: ស្វែងយល់ពីរបៀបកំណត់ប៉ារ៉ាម៉ែត្រម៉ាស៊ីន HPLC-HRMS ដូចជាការប្រើប្រាស់ប៉ូលអ៊ីយ៉ុងអវិជ្ជមាន (Negative mode) និងការប្រើប្រាស់កម្មវិធីដើម្បីអាន និងបកស្រាយលទ្ធផល Chromatogram
  5. សិក្សាពីការរៀបចំស្តង់ដារគុណភាព ISO/IEC 17025: ស្វែងយល់ពីលក្ខន្តិកៈ និងប្រព័ន្ធគ្រប់គ្រងគុណភាពសម្រាប់មន្ទីរពិសោធន៍ ដើម្បីអាចរៀបចំឯកសារនីតិវិធីប្រតិបត្តិការស្តង់ដារ (SOPs) សម្រាប់ការធ្វើតេស្ត Ochratoxin A ដែលអាចជួយជំរុញការស្នើសុំការទទួលស្គាល់ជាផ្លូវការនៅពេលអនាគត។

៥. វាក្យសព្ទបច្ចេកទេស (Technical Glossary)

ពាក្យបច្ចេកទេស ការពន្យល់ជាខេមរភាសា (Khmer Explanation) និយមន័យសាមញ្ញ (Simple Definition)
Ochratoxin A (អូក្រាតុកស៊ីន អេ) ជាសារធាតុពុលម្យ៉ាងដែលផលិតឡើងដោយផ្សិតប្រភេទ Aspergillus និង Penicillium ដែលតែងតែដុះលើគ្រាប់ធញ្ញជាតិ និងអាចបង្កគ្រោះថ្នាក់ដល់តម្រងនោម ថ្លើម និងត្រូវបានចាត់ថ្នាក់ជាសារធាតុដែលអាចបង្កជំងឺមហារីក។ ដូចជាថ្នាំបំពុលលាក់មុខដែលផ្សិតបញ្ចេញចោលទៅក្នុងចំណីអាហារនៅពេលវាដុះផ្សិត ហើយយើងមើលមិនឃើញដោយភ្នែកទទេនោះទេ។
High Performance Liquid Chromatography - High Resolution Mass Spectrometry / HPLC-HRMS (ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីអង្គធាតុរាវកម្រិតខ្ពស់ - ម៉ាស់ស្ប៉ិចត្រូម៉ែត្រកម្រិតច្បាស់ខ្ពស់) ជាបច្ចេកទេសវិភាគគីមីកម្រិតខ្ពស់ដែលផ្សំបញ្ចូលគ្នារវាងការបំបែកសារធាតុលាយឡំគ្នានៅក្នុងអង្គធាតុរាវ (HPLC) និងការវាស់ទម្ងន់ម៉ាសនៃម៉ូលេគុលយ៉ាងច្បាស់លាស់ (HRMS) ដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណ និងបរិមាណសារធាតុពុលក្នុងកម្រិតទាបបំផុត។ ដូចជាម៉ាស៊ីនស្កេនទំនើបដែលអាចបែងចែក និងប្រាប់ឈ្មោះមនុស្សម្នាក់ៗបានយ៉ាងច្បាស់ ទោះបីជាពួកគេកំពុងដើរលាយឡំគ្នាក្នុងហ្វូងមនុស្សរាប់ម៉ឺននាក់ក៏ដោយ។
Method validation (ការផ្ទៀងផ្ទាត់សុពលភាពវិធីសាស្ត្រ) ជាដំណើរការសាកល្បង និងបញ្ជាក់តាមរយៈទិន្នន័យស្ថិតិថា វិធីសាស្ត្រវិភាគណាមួយពិតជាមានភាពត្រឹមត្រូវ ច្បាស់លាស់ អាចជឿទុកចិត្តបាន និងស័ក្តិសមសម្រាប់គោលបំណងនៃការប្រើប្រាស់ជាក់ស្តែង មុននឹងយកទៅអនុវត្តជាផ្លូវការនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍។ ដូចជាការយកជញ្ជីងទៅថ្លឹងដុំដែកស្តង់ដារច្រើនដង ដើម្បីប្រាកដថាជញ្ជីងនោះពិតជាថ្លឹងបានត្រឹមត្រូវមុននឹងយកវាទៅថ្លឹងមាសលក់ឱ្យអតិថិជន។
Limit of Detection / LOD (ដែនកំណត់នៃការរកឃើញ) ជាកម្រិតកំហាប់ទាបបំផុតនៃសារធាតុណាមួយ (ដូចជាសារធាតុពុល) នៅក្នុងគំរូ ដែលម៉ាស៊ីនវិភាគអាចចាប់សញ្ញាដឹងថាមានវត្តមានសារធាតុនោះ ប៉ុន្តែមិនទាន់អាចវាស់បរិមាណវាបានច្បាស់លាស់ និងប្រាកដប្រជានៅឡើយទេ។ ដូចជាការស្តាប់ឮសំឡេងខ្សឹបតិចៗដែលធ្វើឱ្យអ្នកដឹងថាមានមនុស្សនៅជិត ប៉ុន្តែអ្នកមិនអាចស្តាប់បានច្បាស់ថាគេនិយាយពីអ្វី។
Limit of Quantitation / LOQ (ដែនកំណត់នៃការវាស់វែងបរិមាណ) ជាកម្រិតកំហាប់ទាបបំផុតនៃសារធាតុគោលដៅ ដែលម៉ាស៊ីនមិនត្រឹមតែអាចរកឃើញវត្តមានរបស់វាប៉ុណ្ណោះទេ ថែមទាំងអាចវាស់វែងរាយការណ៍ពីបរិមាណរបស់វាបានយ៉ាងច្បាស់លាស់ ត្រឹមត្រូវ និងមានភាពទៀងទាត់។ ដូចជាការឮសំឡេងអ្នកណាម្នាក់និយាយ ហើយអ្នកអាចស្តាប់បានច្បាស់គ្រប់ពាក្យពេចន៍តែម្តង។
Ion polarity (ប៉ូលអ៊ីយ៉ុង) ជាការកំណត់បន្ទុកអគ្គិសនី (វិជ្ជមាន ឬអវិជ្ជមាន) ទៅលើម៉ូលេគុលនៃសារធាតុក្នុងម៉ាស៊ីន Mass Spectrometry ដើម្បីធ្វើឱ្យពួកវាអាចហោះទៅប៉ះឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាបាន។ ការសិក្សានេះរកឃើញថា ការប្រើប៉ូលអវិជ្ជមាន (Negative mode) ជួយឱ្យការចាប់សញ្ញា Ochratoxin A បានល្អជាង។ ដូចជាការជ្រើសរើសប្រើមេដែកប៉ូលជើង ឬប៉ូលត្បូង ដើម្បីឆក់ទាញយកវត្ថុដែកដែលយើងចង់បានចេញពីគំនរសំរាមឱ្យបានប្រសើរបំផុត។
Mobile phase (សូលុយស្យុងចល័ត) ជាអង្គធាតុរាវ (ជាទូទៅជាល្បាយនៃសារធាតុរំលាយដូចជា ទឹក អាស៊ីតហ្វរមិច និងអាសេតូនីទ្រីល) ដែលមានតួនាទីនាំយកគំរូវិភាគឱ្យហូរឆ្លងកាត់បំពង់កូឡោន (Column) ដើម្បីធ្វើការបំបែកសារធាតុនីមួយៗចេញពីគ្នាផ្អែកលើលក្ខណៈគីមីរបស់វា។ ដូចជាទឹកទន្លេដែលហូរនាំយកកម្ទេចកំទីផ្សេងៗទៅតាមចរន្តទឹក ដោយវត្ថុធ្ងន់ៗហូរយឺត ហើយវត្ថុស្រាលៗហូរលឿន ដែលធ្វើឱ្យពួកវាបែកចេញពីគ្នា។
Immunoaffinity column / IAC (កូឡោនភាពទាក់ទាញភាពស៊ាំ) ជាបំពង់ចម្រោះពិសេសដែលផ្ទុកនូវអង្គទីគ័រ (Antibody) ដែលមានលក្ខណៈជីវសាស្ត្រអាចចាប់យកតែសារធាតុគោលដៅ (Ochratoxin A) ទុក រួចបញ្ចេញចោលនូវសារធាតុរំខានផ្សេងៗ ដើម្បីសម្អាតគំរូឱ្យបានបរិសុទ្ធល្អមុននឹងយកទៅវិភាគក្នុងម៉ាស៊ីន។ ដូចជាសំណាញ់ត្រីទิព្វដែលអាចចាប់បានតែត្រីក្រហម ហើយបណ្តោយឱ្យត្រីប្រភេទផ្សេងៗ ក៏ដូចជាកម្ទេចកំទីផ្សេងៗហែលឆ្លងកាត់បានដោយសេរី។

៦. ប្រធានបទពាក់ព័ន្ធ (Further Reading)

អត្ថបទដែលបានបោះពុម្ពនៅលើ KhmerResearch ដែលទាក់ទងនឹងប្រធានបទនេះ៖

ប្រធានបទ និងសំណួរស្រាវជ្រាវដែលទាក់ទងនឹងឯកសារនេះ ដែលអ្នកអាចស្វែងរកបន្ថែម៖