Original Title: Development of Immunological Test Kit for the Detection of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) in Swine
Source: li01.tci-thaijo.org
Disclaimer: Summary generated by AI based on the provided document. Please refer to the original paper for full scientific accuracy.

ការអភិវឌ្ឍឧបករណ៍ធ្វើតេស្តប្រព័ន្ធភាពស៊ាំសម្រាប់ការរកឃើញវីរុសរោគសញ្ញាបន្តពូជនិងផ្លូវដង្ហើមជ្រូក (PRRSV) នៅក្នុងសត្វជ្រូក

ចំណងជើងដើម៖ Development of Immunological Test Kit for the Detection of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) in Swine

អ្នកនិពន្ធ៖ Surasak Jittavisutthikul (Center for Agricultural Biotechnology, Kasetsart University), Amara Thongpan (Department of Genetics, Faculty of Science, Kasetsart University), Orawan Boodde (Department of Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Kasetsart University), Wilairat Shumsing (Department of Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Kasetsart University), Worawidh Wajjwalku (Department of Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Kasetsart University)

ឆ្នាំបោះពុម្ព៖ 2008 Kasetsart J. (Nat. Sci.)

វិស័យសិក្សា៖ Veterinary Immunology

១. សេចក្តីសង្ខេបប្រតិបត្តិ (Executive Summary)

បញ្ហា (The Problem)៖ ជំងឺរោគសញ្ញាបន្តពូជនិងផ្លូវដង្ហើមជ្រូក (PRRS) បង្កឡើងដោយវីរុសពីរប្រភេទគឺអឺរ៉ុបនិងអាមេរិក ដែលបណ្តាលឱ្យមានការខាតបង់សេដ្ឋកិច្ចយ៉ាងធ្ងន់ធ្ងរដល់ឧស្សាហកម្មចិញ្ចឹមជ្រូក ទាមទារឱ្យមានឧបករណ៍ធ្វើតេស្តរោគវិនិច្ឆ័យដែលមានភាពសុក្រឹតនិងមានប្រសិទ្ធភាព។

វិធីសាស្ត្រ (The Methodology)៖ ការសិក្សានេះបានអភិវឌ្ឍវិធីសាស្ត្រធ្វើតេស្តដោយប្រើប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ (ELISA) សម្រាប់ការរកមើលអង្គបដិប្រាណក្នុងសេរ៉ូមប្រឆាំងនឹងវីរុសទាំងពីរប្រភេទក្នុងពេលតែមួយ ដោយប្រើប្រាស់ប្រូតេអ៊ីនផ្សំ។

លទ្ធផលសំខាន់ៗ (The Verdict)៖

២. ការវិភាគលើប្រសិទ្ធភាព និងដែនកំណត់ (Performance & Constraints)

វិធីសាស្ត្រ (Method) គុណសម្បត្តិ (Pros) គុណវិបត្តិ (Cons) លទ្ធផលគន្លឹះ (Key Result)
USEU PRRS ELISA (Developed Kit)
ការធ្វើតេស្តអង់ស៊ីមភ្ជាប់ប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ (ELISA) ដែលបានអភិវឌ្ឍថ្មីដោយប្រើប្រូតេអ៊ីនផ្សំ USEU-rN
ចំណាយតិច អាចរកឃើញអង្គបដិប្រាណប្រឆាំងនឹងវីរុសទាំងប្រភេទអឺរ៉ុបនិងអាមេរិកក្នុងពេលតែមួយ ងាយស្រួលប្រើ និងស័ក្តិសមសម្រាប់ការស្រាវជ្រាវទ្រង់ទ្រាយធំ។ ទាមទារដំណើរការបន្សុតប្រូតេអ៊ីនដោយផ្នែកសិន ហើយអាចមានភាពជាក់លាក់ទាបជាងឧបករណ៍ពាណិជ្ជកម្មបន្តិចនៅពេលប្រៀបធៀបក្នុងលក្ខខណ្ឌខ្លះ។ សម្រេចបានភាពប្រែប្រួល (Sensitivity) ៩៧,៥% និងភាពជាក់លាក់ (Specificity) ១០០% នៅតម្លៃកាត់ផ្តាច់ ០,៤ និងមានកម្រិតយល់ព្រម (Kappa value) ០,៧៩១៦ បើធៀបនឹង IDEXX។
IDEXX® HerdCheck PRRS ELISA
ឧបករណ៍ធ្វើតេស្តពាណិជ្ជកម្មស្តង់ដារ IDEXX® ELISA
មានស្តង់ដារគុណភាពខ្ពស់ ផ្តល់លទ្ធផលដែលអាចទុកចិត្តបាន និងត្រូវបានទទួលស្គាល់និងប្រើប្រាស់ជាសកលសម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ។ មានតម្លៃថ្លៃ ដែលធ្វើឱ្យមានការលំបាកនិងចំណាយថវិកាច្រើនក្នុងការប្រើប្រាស់សម្រាប់ការស្រាវជ្រាវ ឬពិនិត្យហ្វូងសត្វទ្រង់ទ្រាយធំ។ ត្រូវបានប្រើជាឧបករណ៍គោល ដោយមានភាពប្រែប្រួល ៩១,៦៧% និងភាពជាក់លាក់ ៧៨,១៣% បើធៀបនឹង IPMA ព្រមទាំងផ្តល់កម្រិតសហសម្ព័ន្ធ ៨២,៦៩% ជាមួយ USEU ELISA។
IPMA (Immunoperoxidase Monolayer Assay)
ការធ្វើតេស្តដោយប្រើប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ IPMA
ជាវិធីសាស្ត្រស្តង់ដារមួយដែលអាចតាមដានការឆ្លើយតបនៃអង្គបដិប្រាណប្រឆាំងនឹងវីរុសបានយ៉ាងច្បាស់លាស់។ ទាមទារពេលវេលាយូរ កម្លាំងពលកម្មច្រើន ស្មុគស្មាញ និងពិបាកអនុវត្តក្នុងកម្រិតមន្ទីរពិសោធន៍ធម្មតា ឬនៅទីវាល។ ត្រូវបានប្រើជាឧបករណ៍គោលរង ដោយបង្ហាញភាពប្រែប្រួល ៩៣,៧៥% និងភាពជាក់លាក់ ៧២,៣៧% បើប្រៀបធៀបជាមួយឧបករណ៍ IDEXX®។

ការចំណាយលើធនធាន (Resource Cost)៖ ការអភិវឌ្ឍឧបករណ៍នេះទាមទារសម្ភារៈមន្ទីរពិសោធន៍ជីវសាស្ត្រម៉ូលេគុលកម្រិតមធ្យម ប៉ុន្តែវាផ្តល់នូវជម្រើសដែលអាចកាត់បន្ថយចំណាយបានច្រើន (cost-effective) ជាងឧបករណ៍ពាណិជ្ជកម្មសម្រាប់ការធ្វើតេស្តទ្រង់ទ្រាយធំ។

៣. ការពិនិត្យសម្រាប់បរិបទកម្ពុជា/អាស៊ីអាគ្នេយ៍

ភាពលំអៀងនៃទិន្នន័យ (Data Bias)៖

ការសិក្សានេះប្រើប្រាស់សំណាកសេរ៉ូមជ្រូកពីប្រទេសថៃ (សំណាកវិជ្ជមានពីការផ្ទុះឡើងក្នុងស្រុក) និងប្រទេសដាណឺម៉ាក (សំណាកអវិជ្ជមាន)។ នេះមានសារៈសំខាន់ខ្លាំងសម្រាប់ប្រទេសកម្ពុជា ដោយសារការផ្លាស់ប្តូរពាណិជ្ជកម្មសត្វជ្រូកតាមព្រំដែនកម្ពុជា-ថៃមានសកម្មភាពញឹកញាប់ និងមានលក្ខខណ្ឌអេកូឡូស៊ីស្រដៀងគ្នា ដែលធ្វើឱ្យវីរុសប្រភេទនេះងាយនឹងឆ្លងរាលដាលចូលមកក្នុងស្រុកដូចគ្នា។

លទ្ធភាពនៃការអនុវត្ត (Applicability)៖

បច្ចេកវិទ្យានេះពិតជាមានអត្ថប្រយោជន៍ និងអាចអនុវត្តបានយ៉ាងល្អសម្រាប់ប្រទេសកម្ពុជា ជាពិសេសក្នុងការគាំទ្រដល់វិស័យសុខភាពសត្វ និងការចិញ្ចឹមជ្រូក។

ជារួម ការផលិតឧបករណ៍តេស្តនេះដោយខ្លួនឯង ឬការរៀបចំបច្ចេកទេសស្រដៀងគ្នានេះនៅកម្ពុជា នឹងពង្រឹងភាពម្ចាស់ការលើការរាវរកជំងឺឆ្លងសត្វ និងជួយការពារសេដ្ឋកិច្ចកសិករក្នុងស្រុកប្រកបដោយនិរន្តរភាព។

៤. ផែនការសកម្មភាពសម្រាប់និស្សិត (Actionable Roadmap)

ដើម្បីអនុវត្តតាមការសិក្សានេះ និស្សិតគួរអនុវត្តតាមជំហានខាងក្រោម៖

  1. សិក្សាមូលដ្ឋានគ្រឹះនៃជីវសាស្ត្រម៉ូលេគុល និងរោគវិទ្យាសត្វ: ស្វែងយល់ពីបច្ចេកទេស RT-PCR និងការចម្លងហ្សែនដោយប្រើយន្តការ pDrive cloning vectors ដើម្បីពង្រីកហ្សែន ORF7 របស់វីរុស PRRS ទាំងពីរប្រភេទ។
  2. ការផលិត និងបន្សុតប្រូតេអ៊ីន Recombinant: អនុវត្តការបណ្តុះបាក់តេរី Escherichia coli ដោយប្រើប្រាស់ IPTG induction និងរៀនពីបច្ចេកទេសបន្សុតប្រូតេអ៊ីនដោយប្រើ 8M urea រួចបញ្ជាក់លទ្ធផលតាមរយៈ SDS-PAGE និង Western blot
  3. ការអភិវឌ្ឍបច្ចេកទេស ELISA និងកំណត់ស្តង់ដារ: រៀបចំការធ្វើតេស្ត Checkerboard titration ដើម្បីកំណត់កម្រិតរលាយសេរ៉ូម និងអង់ទីហ្សែនដែលល្អបំផុត រួចប្រើប្រាស់ Two Graph-ROC program ដើម្បីគណនាតម្លៃ Cut-off value
  4. ការធ្វើសុពលភាពលើសំណាកជាក់ស្តែងកម្ពុជា (Field Validation): ប្រមូលសំណាកសេរ៉ូមជ្រូកពីកសិដ្ឋានក្នុងស្រុក ហើយប្រៀបធៀបលទ្ធផលនៃការធ្វើតេស្តថ្មីនេះជាមួយនឹងឧបករណ៍ពាណិជ្ជកម្មដូចជា IDEXX® HerdCheck PRRS ELISA ដើម្បីវាស់ស្ទង់ភាពសុក្រឹត (កម្រិតអថេរ Kappa)។

៥. វាក្យសព្ទបច្ចេកទេស (Technical Glossary)

ពាក្យបច្ចេកទេស ការពន្យល់ជាខេមរភាសា (Khmer Explanation) និយមន័យសាមញ្ញ (Simple Definition)
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (ការធ្វើតេស្តអង់ស៊ីមភ្ជាប់ប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ) គឺជាបច្ចេកទេសមន្ទីរពិសោធន៍ដែលប្រើប្រាស់អង់ស៊ីម និងអង្គបដិប្រាណ (Antibodies) ដើម្បីស្វែងរក និងវាស់ស្ទង់បរិមាណសារធាតុណាមួយ (ដូចជាប្រូតេអ៊ីនវីរុស ឬអង្គបដិប្រាណប្រឆាំងវីរុស) នៅក្នុងសំណាកឈាម ឬសេរ៉ូមសត្វ។ ដូចជាការប្រើប្រាស់មេដែកពិសេសមួយដែលអាចឆក់ទាញយកតែដែកគោលចេញពីគំនរខ្សាច់ រួចបញ្ចេញពន្លឺដើម្បីឱ្យយើងដឹងថាមានដែកគោលចំនួនប៉ុន្មាន។
Fusion nucleocapsid protein (ប្រូតេអ៊ីននុយក្លេអូកាប់ស៊ីតរួមបញ្ចូលគ្នា) ជាប្រូតេអ៊ីនសិប្បនិម្មិតដែលបង្កើតឡើងដោយការផ្សំ (ភ្ជាប់) ហ្សែនដែលផលិតប្រូតេអ៊ីនស្រទាប់ការពាររបស់វីរុសពីរប្រភេទផ្សេងគ្នា (វីរុស PRRSV អឺរ៉ុប និងអាមេរិក) ទៅជាប្រូតេអ៊ីនតែមួយ ដើម្បីងាយស្រួលយកទៅធ្វើតេស្តរកវីរុសទាំងពីរក្នុងពេលតែមួយ។ ដូចជាការបូកបញ្ចូលរូបថតមុខសញ្ញាចោរពីរនាក់ផ្សេងគ្នាទៅជារូបភាពតែមួយសន្លឹក ដើម្បីឱ្យប៉ូលីសងាយស្រួលចំណាំនិងតាមចាប់ពួកគេទាំងពីរក្នុងពេលតែមួយ។
Checkerboard titration (ការធ្វើទីត្រាស្វ័យគុណរាងក្ដារអុក) ជាវិធីសាស្ត្រសាកល្បងនៅក្នុងការធ្វើតេស្ត ELISA ដើម្បីស្វែងរកកម្រិតរលាយ (Dilution) ដ៏ល្អបំផុតនៃអង់ទីហ្សែន និងសេរ៉ូម ដោយដាក់ពួកវាឆ្លាស់គ្នាក្នុងកម្រិតផ្សេងៗគ្នានៅលើបន្ទះតេស្តដែលមានក្រឡាដូចក្ដារអុក ដើម្បីទទួលបានលទ្ធផលរលកសញ្ញាច្បាស់បំផុត។ ដូចជាការសាកល្បងលាយកម្រិតស្ករ និងកម្រិតកាហ្វេក្នុងបរិមាណផ្សេងៗគ្នាជាច្រើនកែវ ដើម្បីស្វែងរករូបមន្តកាហ្វេមួយដែលឆ្ងាញ់និងមានតុល្យភាពបំផុត។
Cut-off value (តម្លៃកាត់ផ្តាច់) គឺជាចំណុចព្រំដែន ឬតម្លៃទិន្នន័យគោលដែលគេកំណត់ឡើងតាមរយៈកម្មវិធីស្ថិតិ (ដូចជា ROC curve) ដើម្បីបែងចែកឱ្យដាច់ស្រឡះថាតើសំណាកមួយមានផ្ទុកមេរោគ (វិជ្ជមាន) ឬគ្មានមេរោគ (អវិជ្ជមាន)។ ដូចជាការកំណត់ពិន្ទុប្រឡងជាប់គឺ ៥០ពិន្ទុ បើបាន ៥០ ឡើងទៅគឺជាប់ (វិជ្ជមាន) បើក្រោម ៥០ គឺធ្លាក់ (អវិជ្ជមាន)។
Kappa (κ) value (តម្លៃកាប៉ា) ជារង្វាស់ស្ថិតិដែលប្រើសម្រាប់វាស់ស្ទង់កម្រិតនៃការយល់ព្រម ឬភាពស្របគ្នា (Agreement) រវាងឧបករណ៍ធ្វើតេស្តពីរផ្សេងគ្នា ដើម្បីបញ្ជាក់ថាឧបករណ៍ថ្មីពិតជាអាចផ្តល់លទ្ធផលប្រហាក់ប្រហែលគ្នានឹងឧបករណ៍ស្តង់ដារដែរឬទេ។ ដូចជាការប្រៀបធៀបចម្លើយរបស់សិស្សពីរនាក់លើវិញ្ញាសាតែមួយ បើចម្លើយពួកគេដូចគ្នាស្ទើរតែទាំងអស់ នោះបញ្ជាក់ថាពួកគេទាំងពីរមានកម្រិតយល់ដឹងស្របគ្នាខ្ពស់បំផុត។
Recombinant protein expressed in Escherichia coli (ប្រូតេអ៊ីនតំណពូជដែលបញ្ចេញក្នុងបាក់តេរី E. coli) ជាដំណើរការដែលអ្នកវិទ្យាសាស្ត្របញ្ចូលហ្សែនគោលដៅរបស់វីរុសទៅក្នុងបាក់តេរី Escherichia coli ដើម្បីបញ្ជាឱ្យបាក់តេរីនោះផលិតប្រូតេអ៊ីនរបស់វីរុសក្នុងបរិមាណច្រើន សម្រាប់យកមកប្រើប្រាស់ជាអង់ទីហ្សែនក្នុងឧបករណ៍ធ្វើតេស្ត។ ដូចជាការយកប្លង់រចនាផ្ទះ (ហ្សែនវីរុស) ទៅឱ្យរោងចក្រ (បាក់តេរី) ដើម្បីឱ្យរោងចក្រនោះផលិតគ្រឿងបន្លាស់ផ្ទះ (ប្រូតេអ៊ីន) ឱ្យយើងក្នុងបរិមាណច្រើននិងលឿន។
Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) (ប្រតិកម្មច្រវាក់ប៉ូលីមេរ៉ាសដោយចម្លងបញ្ច្រាស) ជាបច្ចេកទេសម៉ូលេគុលដែលបំប្លែងសារធាតុសេនេទិចប្រភេទ RNA របស់វីរុសទៅជា DNA រួចធ្វើការចម្លងបន្តពង្រីកចំនួន DNA នោះឱ្យបានច្រើនលានដង ដើម្បីឱ្យគេអាចមើលឃើញនិងសិក្សាពីហ្សែនរបស់វាបានយ៉ាងងាយស្រួល។ ដូចជាការថតចម្លងឯកសារដែលសរសេរដោយដៃ (RNA) ទៅជាឯកសារកុំព្យូទ័រ (DNA) រួចព្រីនចេញមកជាច្រើនម៉ឺនច្បាប់ ដើម្បីងាយស្រួលអាននិងយកទៅប្រើប្រាស់បន្ត។

៦. ប្រធានបទពាក់ព័ន្ធ (Further Reading)

អត្ថបទដែលបានបោះពុម្ពនៅលើ KhmerResearch ដែលទាក់ទងនឹងប្រធានបទនេះ៖

ប្រធានបទ និងសំណួរស្រាវជ្រាវដែលទាក់ទងនឹងឯកសារនេះ ដែលអ្នកអាចស្វែងរកបន្ថែម៖