Original Title: In Vitro Selection of Potential Lactic Acid Bacteria Isolated from Ducks and Geese in Thailand
Source: li01.tci-thaijo.org
Disclaimer: Summary generated by AI based on the provided document. Please refer to the original paper for full scientific accuracy.

ការជ្រើសរើសក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ (In Vitro) នូវបាក់តេរីអាស៊ីតឡាក់ទិកដែលមានសក្តានុពល ដែលបំបែកចេញពីសត្វទា និងក្ងាននៅប្រទេសថៃ

ចំណងជើងដើម៖ In Vitro Selection of Potential Lactic Acid Bacteria Isolated from Ducks and Geese in Thailand

អ្នកនិពន្ធ៖ Thachawech Kimprasit (Department of Microbiology and Immunology, Kasetsart University), Sirapan Sukontasing (Faculty of Veterinary Technology, Kasetsart University), Patamabhorn Amavisit (Department of Microbiology and Immunology, Kasetsart University)

ឆ្នាំបោះពុម្ព៖ 2013 Agriculture and Natural Resources / Kasetsart J. (Nat. Sci.)

វិស័យសិក្សា៖ Veterinary Microbiology

១. សេចក្តីសង្ខេបប្រតិបត្តិ (Executive Summary)

បញ្ហា (The Problem)៖ ការសិក្សានេះផ្តោតលើការស្វែងរក និងវាយតម្លៃបាក់តេរីអាស៊ីតឡាក់ទិក (Lactic Acid Bacteria) ដែលមាននៅក្នុងលាមកសត្វទា និងក្ងាន ដើម្បីចម្រាញ់យកប្រភេទបាក់តេរីមានប្រយោជន៍ ដែលមានសក្តានុពលធ្វើជាប្រូបាយអូទិក (Probiotics) សម្រាប់ជំនួសការប្រើប្រាស់ថ្នាំអង់ទីប៊ីយោទិកជំរុញការលូតលាស់ក្នុងវិស័យចិញ្ចឹមបក្សី។

វិធីសាស្ត្រ (The Methodology)៖ ការស្រាវជ្រាវនេះបានបំបែកសំណាកបាក់តេរីសរុបចំនួន ១០៤ ពីលាមកសត្វ និងធ្វើតេស្តក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ (In vitro) ដើម្បីវាយតម្លៃលក្ខណៈសម្បត្តិប្រូបាយអូទិក និងសមត្ថភាពរស់រានរបស់ពួកវា។

លទ្ធផលសំខាន់ៗ (The Verdict)៖

២. ការវិភាគលើប្រសិទ្ធភាព និងដែនកំណត់ (Performance & Constraints)

វិធីសាស្ត្រ (Method) គុណសម្បត្តិ (Pros) គុណវិបត្តិ (Cons) លទ្ធផលគន្លឹះ (Key Result)
Inhibitory Activity Test (Agar well diffusion assay)
ការធ្វើតេស្តសកម្មភាពទប់ស្កាត់ (Agar well diffusion assay)
ងាយស្រួលក្នុងការពិនិត្យសំណាកច្រើនដើម្បីរកមើលសកម្មភាពប្រឆាំងនឹងបាក់តេរីបង្កជំងឺផ្សេងៗក្នុងពេលតែមួយ។ មិនអាចបញ្ជាក់ច្បាស់ថាសកម្មភាពទប់ស្កាត់បណ្តាលមកពីអាស៊ីតឡាក់ទិកសុទ្ធសាធ ឬសារធាតុប្រឆាំងបាក់តេរីផ្សេងទៀតនោះទេ។ សំណាក ១០១ ក្នុងចំណោម ១០៤ បានបង្ហាញពីតំបន់ទប់ស្កាត់ (Inhibition zones) ទៅលើបាក់តេរីបង្កជំងឺ។
Acid and Bile Tolerance Test
ការធ្វើតេស្តភាពធន់នឹងអាស៊ីត និងទឹកប្រមាត់
ជួយចម្លងតាមលក្ខខណ្ឌជាក់ស្តែងនៃផ្លូវរំលាយអាហារ (GIT) របស់សត្វ ដើម្បីវាយតម្លៃអត្រារស់រានមានជីវិតរបស់បាក់តេរី។ លទ្ធផលសាកល្បងក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ (In vitro) អាចនឹងមិនឆ្លុះបញ្ចាំងទាំងស្រុងពីភាពស្មុគស្មាញពិតប្រាកដក្នុងរាងកាយសត្វ (In vivo) នោះទេ។ សំណាកចំនួន ២៨ អាចរស់រានមានជីវិតបានក្នុងលក្ខខណ្ឌអាស៊ីតខ្លាំង (pH ២) និងទឹកប្រមាត់មាន់ ៣%។
Cell Surface Hydrophobicity Test
ការធ្វើតេស្តសមត្ថភាពតោងជាប់ (Cell surface hydrophobicity test)
ជាវិធីសាស្ត្រប្រយោលដ៏ល្អដើម្បីវាយតម្លៃសមត្ថភាពតោងជាប់របស់បាក់តេរីទៅនឹងកោសិកាពោះវៀនរបស់សត្វ។ ទាមទារការប្រើប្រាស់សារធាតុគីមី និងប្រដាប់វាស់ពន្លឺ (Spectrophotometer) សម្រាប់ការវាស់វែងកម្រិតពន្លឺ (OD) យ៉ាងជាក់លាក់។ សំណាកដែលល្អបំផុតចំនួន ៣ មានអត្រានៃការតោងជាប់ចាប់ពី ២៦.០០% ទៅ ២៧.៧០%។
16S rRNA Gene Sequencing
ការកំណត់អត្តសញ្ញាណតាមរយៈការវិភាគហ្សែន 16S rRNA
មានភាពសុក្រឹតខ្ពស់ក្នុងការកំណត់អត្តសញ្ញាណប្រភេទ (Species) របស់បាក់តេរីបានយ៉ាងច្បាស់លាស់។ អាចនឹងមិនគ្រប់គ្រាន់ក្នុងការបែងចែកប្រភេទរង (Subspecies) ដែលមានទំនាក់ទំនងហ្សែនជិតស្និទ្ធខ្លាំង (ទាមទារការវិភាគហ្សែនច្រើនមុខបន្ថែម)។ កំណត់អត្តសញ្ញាណបានជោគជ័យនូវប្រភេទបាក់តេរី Lactobacillus delbrueckii និង Lactobacillus reuteri

ការចំណាយលើធនធាន (Resource Cost)៖ ការសិក្សានេះទាមទារធនធានមន្ទីរពិសោធន៍មីក្រូជីវសាស្ត្រ និងជីវសាស្ត្រម៉ូលេគុលកម្រិតមធ្យមទៅខ្ពស់ រួមទាំងឧបករណ៍សម្រាប់បណ្ដុះបាក់តេរី និងការវិភាគហ្សែន។

៣. ការពិនិត្យសម្រាប់បរិបទកម្ពុជា/អាស៊ីអាគ្នេយ៍

ភាពលំអៀងនៃទិន្នន័យ (Data Bias)៖

ការសិក្សានេះប្រមូលសំណាកលាមកពីសត្វទា និងក្ងាន ដែលចិញ្ចឹមតាមបែបលែងឱ្យរកស៊ីតាមធម្មជាតិក្នុងកសិដ្ឋានគ្រួសារនៅប្រទេសថៃ។ ដោយសារកម្ពុជាមានប្រព័ន្ធកសិកម្ម អាកាសធាតុ និងការចិញ្ចឹមទាលែងតាមវាលស្រែ ឬបឹងស្រដៀងគ្នានឹងប្រទេសថៃ បាក់តេរីបរិស្ថាន និងពោះវៀនសត្វនៅកម្ពុជាទំនងជាមានលក្ខណៈប្រហាក់ប្រហែលគ្នានឹងសំណាកក្នុងស្រាវជ្រាវនេះ ដែលធ្វើឱ្យទិន្នន័យនេះមានភាពពាក់ព័ន្ធខ្ពស់។

លទ្ធភាពនៃការអនុវត្ត (Applicability)៖

វិធីសាស្ត្រក្នុងការចម្រាញ់ និងជ្រើសរើសបាក់តេរីប្រូបាយអូទិកនេះ មានសក្តានុពលខ្លាំងក្នុងការយកមកអនុវត្តនៅប្រទេសកម្ពុជា ដើម្បីលើកកម្ពស់វិស័យចិញ្ចឹមសត្វ។

ការអភិវឌ្ឍប្រូបាយអូទិកក្នុងស្រុកដោយខ្លួនឯង មិនត្រឹមតែជួយជំរុញសុខុមាលភាពសត្វ និងផលិតកម្មកសិកម្មប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែថែមទាំងជួយទប់ស្កាត់បញ្ហាស៊ាំនឹងថ្នាំអង់ទីប៊ីយោទិក (Antimicrobial Resistance) ដែលកំពុងជាបញ្ហាប្រឈមធំមួយនៅកម្ពុជាផងដែរ។

៤. ផែនការសកម្មភាពសម្រាប់និស្សិត (Actionable Roadmap)

ដើម្បីអនុវត្តតាមការសិក្សានេះ និស្សិតគួរអនុវត្តតាមជំហានខាងក្រោម៖

  1. អនុវត្តបច្ចេកទេសមីក្រូជីវសាស្ត្រមូលដ្ឋាន: និស្សិតត្រូវស្វែងយល់ពីរបៀបប្រមូលសំណាកលាមកសត្វ ការបណ្ដុះ និងការញែកបាក់តេរីអាស៊ីតឡាក់ទិកដោយប្រើប្រាស់មជ្ឈដ្ឋាន MRS Agar និងប្រព័ន្ធបង្កើតបរិយាកាសគ្មានអុកស៊ីហ្សែនដូចជា Anaeropack
  2. ធ្វើតេស្តលក្ខណៈប្រូបាយអូទិកក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍: ត្រូវរៀនអនុវត្តការធ្វើតេស្តសកម្មភាពទប់ស្កាត់បាក់តេរីបង្កជំងឺ (Agar well diffusion assay) ព្រមទាំងការធ្វើតេស្តភាពធន់នឹងកម្រិតអាស៊ីត (pH ២-៤) និងទឹកប្រមាត់ ដើម្បីរើសយកបាក់តេរីដែលមានភាពធន់ខ្លាំងបំផុត។
  3. វាយតម្លៃសមត្ថភាពតោងជាប់ និងភាពស៊ាំនឹងថ្នាំ: អនុវត្តការធ្វើតេស្តសមត្ថភាពតោងជាប់របស់កោសិកាបាក់តេរីដោយប្រើប្រាស់សារធាតុគីមី (n-hexadecane) និងវាយតម្លៃភាពងាយរងគ្រោះនឹងថ្នាំអង់ទីប៊ីយោទិក (Antimicrobial susceptibility test) ដោយផ្អែកលើស្តង់ដារ CLSI
  4. អនុវត្តការវិភាគម៉ូលេគុល និងជីវព័ត៌មានវិទ្យា: ធ្វើការចម្រាញ់ DNA បង្កើនចំនួនហ្សែនគោលដៅដោយប្រើប្រាស់ម៉ាស៊ីន PCR រួចប្រើប្រាស់កម្មវិធី BLAST និង BioEdit ដើម្បីវិភាគលំដាប់ហ្សែន 16S rRNA សម្រាប់កំណត់អត្តសញ្ញាណបាក់តេរី។
  5. សាកល្បងអនុវត្តផ្ទាល់លើសត្វពាហនៈកសិកម្ម: បន្ទាប់ពីទទួលបាន និងកំណត់អត្តសញ្ញាណបាក់តេរីប្រូបាយអូទិកដ៏ល្អរួចរាល់ សូមរៀបចំគម្រោងស្រាវជ្រាវ (In vivo) សហការជាមួយកសិដ្ឋាន ដើម្បីដាក់បញ្ចូលវាទៅក្នុងចំណីសត្វ និងតាមដានការលូតលាស់ជាក់ស្តែង។

៥. វាក្យសព្ទបច្ចេកទេស (Technical Glossary)

ពាក្យបច្ចេកទេស ការពន្យល់ជាខេមរភាសា (Khmer Explanation) និយមន័យសាមញ្ញ (Simple Definition)
In Vitro (ក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍) ការសិក្សា ឬការធ្វើតេស្តដែលប្រព្រឹត្តទៅនៅក្រៅរាងកាយសត្វមានជីវិត ពោលគឺធ្វើឡើងនៅក្នុងបំពង់សាកល្បង ឬចានបណ្តុះបាក់តេរីក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ ដើម្បីពិនិត្យមើលលក្ខណៈសម្បត្តិបឋម មុននឹងយកទៅសាកល្បងផ្ទាល់លើសត្វ (In vivo)។ ដូចជាការសាកល្បងដាំគ្រាប់ពូជក្នុងផើងតូចមួយក្នុងផ្ទះ ដើម្បីមើលថាវាដុះឬអត់ មុននឹងយកទៅដាំក្នុងចម្ការធំ។
Lactic Acid Bacteria / LAB (បាក់តេរីអាស៊ីតឡាក់ទិក) ក្រុមបាក់តេរីដែលមានប្រយោជន៍ (ឧទាហរណ៍ប្រភេទ Lactobacillus) ដែលអាចបំប្លែងជាតិស្ករទៅជាអាស៊ីតឡាក់ទិក ជួយទប់ស្កាត់ការលូតលាស់របស់មេរោគក្នុងផ្លូវរំលាយអាហារ និងត្រូវបានគេប្រើប្រាស់ជាទូទៅធ្វើជាប្រូបាយអូទិកសម្រាប់សត្វ និងមនុស្ស។ ដូចជាទាហានការពារពោះវៀន ដែលជួយរំលាយអាហារ និងបញ្ចេញជាតិជូរដើម្បីបណ្តេញបាក់តេរីអាក្រក់ចេញ។
Cell surface hydrophobicity (ភាពមិនចូលចិត្តទឹកនៃផ្ទៃកោសិកា) រង្វាស់នៃសមត្ថភាពរបស់បាក់តេរីក្នុងការរុញច្រានទឹកចេញពីផ្ទៃរបស់វា។ ក្នុងន័យប្រូបាយអូទិក កម្រិត hydrophobicity ខ្ពស់បញ្ជាក់ថាបាក់តេរីនោះអាចតោងជាប់នឹងកោសិកាពោះវៀនរបស់សត្វបានយ៉ាងល្អ និងអាចរស់នៅបានយូរ។ ដូចជាស្លឹកឈូកដែលរុញច្រានទឹកមិនឱ្យជាប់លើផ្ទៃរបស់វា ដែលលក្ខណៈនេះជួយឱ្យបាក់តេរីអាចតោងស្អិតជាប់ជញ្ជាំងពោះវៀនបានយូរ។
16S rRNA gene sequences analysis (ការវិភាគលំដាប់ហ្សែន 16S rRNA) បច្ចេកទេសជីវសាស្ត្រម៉ូលេគុលដែលប្រើប្រាស់ហ្សែន 16S rRNA ជាម៉ាកឃ័រ (Marker) ដើម្បីប្រៀបធៀប និងកំណត់អត្តសញ្ញាណប្រភេទបាក់តេរី (Species) ឱ្យបានច្បាស់លាស់ ព្រមទាំងស្វែងយល់ពីប្រវត្តិវិវត្តន៍របស់វា។ ដូចជាការស្កេនក្រាមមេដៃ (Fingerprint) ឬធ្វើតេស្ត DNA របស់មនុស្សម្នាក់ៗ ដើម្បីរកឱ្យឃើញច្បាស់ថាគាត់ជាអ្នកណា។
Antimicrobial susceptibility test (ការធ្វើតេស្តភាពងាយរងគ្រោះនឹងថ្នាំអង់ទីប៊ីយោទិក) ការធ្វើតេស្តដើម្បីពិនិត្យមើលថាតើបាក់តេរីមួយប្រភេទ អាចត្រូវសម្លាប់ឬទប់ស្កាត់ការលូតលាស់ដោយថ្នាំអង់ទីប៊ីយោទិកប្រភេទណាមួយ។ ការធ្វើតេស្តនេះសំខាន់ដើម្បីធានាថា បាក់តេរីល្អមិនមានផ្ទុកហ្សែនស៊ាំនឹងថ្នាំដែលអាចចម្លងទៅបាក់តេរីអាក្រក់បាន។ ដូចជាការសាកល្បងប្រើអាវុធខែលការពារផ្សេងៗបាញ់ទៅលើកងទ័ព ដើម្បីមើលថាអាវុធមួយណាមានប្រសិទ្ធភាព និងអាវុធមួយណាដែលទ័ពនោះចេះការពារ។
Agar well diffusion assay (ការធ្វើតេស្តសកម្មភាពទប់ស្កាត់លើចានអាហ្គា) វិធីសាស្ត្រក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ដែលគេចោះរន្ធលើចានចាហួយ (Agar) ដែលមានបាក់តេរីបង្កជំងឺ រួចបន្តក់ទឹកសំណាកបាក់តេរីល្អចូល ដើម្បីមើលថាតើវាអាចបញ្ចេញសារធាតុរារាំងមេរោគមិនឱ្យដុះនៅជុំវិញរន្ធនោះបានកម្រិតណា (Inhibition zone)។ ដូចជាការគូសរង្វង់សុវត្ថិភាពជុំវិញផ្ទះ ដែលចោរ (មេរោគ) មិនអាចបោះជំហានចូលមកជិតបានឡើយ។
Bile tolerance (ភាពធន់នឹងទឹកប្រមាត់) សមត្ថភាពរបស់បាក់តេរីក្នុងការរស់រានមានជីវិត នៅពេលឆ្លងកាត់ពោះវៀនតូចរបស់សត្វ ដែលទីនោះមានផ្ទុកទឹកប្រមាត់ (Bile) ដែលជាសារធាតុពុលដែលអាចសម្លាប់បាក់តេរីភាគច្រើន។ បាក់តេរីល្អចាំបាច់ត្រូវមានលក្ខណៈនេះដើម្បីអាចទៅដល់ និងរស់នៅក្នុងពោះវៀនបាន។ ដូចជាសមត្ថភាពរបស់ទាហាន ដែលអាចដើរឆ្លងកាត់តំបន់ដែលមានឧស្ម័នពុលដោយមិនស្លាប់ ដើម្បីទៅដល់គោលដៅ។

៦. ប្រធានបទពាក់ព័ន្ធ (Further Reading)

អត្ថបទដែលបានបោះពុម្ពនៅលើ KhmerResearch ដែលទាក់ទងនឹងប្រធានបទនេះ៖

ប្រធានបទ និងសំណួរស្រាវជ្រាវដែលទាក់ទងនឹងឯកសារនេះ ដែលអ្នកអាចស្វែងរកបន្ថែម៖