Original Title: Development of Aflatoxin B1 Determination Method by Competitive Lateral Flow Immunoassay
Source: doi.org/10.14456/thaidoa-agres.2023.21
Disclaimer: Summary generated by AI based on the provided document. Please refer to the original paper for full scientific accuracy.

ការអភិវឌ្ឍវិធីសាស្ត្រកំណត់រកសារធាតុពុល Aflatoxin B1 ដោយប្រើបច្ចេកទេស Competitive Lateral Flow Immunoassay

ចំណងជើងដើម៖ Development of Aflatoxin B1 Determination Method by Competitive Lateral Flow Immunoassay

អ្នកនិពន្ធ៖ Nettra Somboonkaew (Postharvest and Processing Research and Development Division, Department of Agriculture), Suppara Aukkasarakul (Postharvest and Processing Research and Development Division, Department of Agriculture), Suphi Wanasirakul (Postharvest and Processing Research and Development Division, Department of Agriculture), Chawalert Trikarunasawat (Postharvest and Processing Research and Development Division, Department of Agriculture)

ឆ្នាំបោះពុម្ព៖ 2023 - Thai Agricultural Research Journal

វិស័យសិក្សា៖ Agricultural Science / Food Safety

១. សេចក្តីសង្ខេបប្រតិបត្តិ (Executive Summary)

បញ្ហា (The Problem)៖ ការសិក្សានេះដោះស្រាយបញ្ហានៃការចម្លងរោគសារធាតុពុលអាហ្វ្លាតុកស៊ីន B1 (Aflatoxin B1) ដែលបង្កើតឡើងដោយផ្សិត Aspergillus flavus នៅក្នុងផលិតផលកសិកម្ម ជាពិសេសសណ្តែកដី ដែលទាមទារវិធីសាស្ត្រត្រួតពិនិត្យរហ័ស មានភាពត្រឹមត្រូវ និងចំណាយតិច។

វិធីសាស្ត្រ (The Methodology)៖ ការស្រាវជ្រាវនេះបានអភិវឌ្ឍឧបករណ៍ធ្វើតេស្តរហ័សគំរូ និងបានវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាពរបស់វាដោយប្រៀបធៀបជាមួយនឹងវិធីសាស្ត្រវិភាគស្តង់ដារ។

លទ្ធផលសំខាន់ៗ (The Verdict)៖

២. ការវិភាគលើប្រសិទ្ធភាព និងដែនកំណត់ (Performance & Constraints)

វិធីសាស្ត្រ (Method) គុណសម្បត្តិ (Pros) គុណវិបត្តិ (Cons) លទ្ធផលគន្លឹះ (Key Result)
Competitive Lateral Flow Immunoassay (CLFIA)
វិធីសាស្ត្រធ្វើតេស្តរហ័ស (CLFIA)
ផ្តល់លទ្ធផលរហ័សក្នុងរយៈពេលត្រឹមតែ ១០-១៥ នាទី និងអាចអានលទ្ធផលបានយ៉ាងងាយស្រួលដោយភ្នែកទទេ ដោយមិនតម្រូវឱ្យមានឧបករណ៍ស្មុគស្មាញ និងចំណាយត្រឹមតែ ៦៥.១៩ បាតក្នុងមួយឈុត។ ផ្តល់លទ្ធផលត្រឹមតែជាគុណភាព (មាន ឬគ្មានសារធាតុពុល) ប៉ុណ្ណោះ ដែលមិនអាចបញ្ជាក់ពីបរិមាណសារធាតុពុលជាក់លាក់បានលម្អិតដូចការវិភាគក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ធំៗឡើយ។ មានភាពត្រឹមត្រូវ ៩៣.៣៣% បើធៀបនឹងវិធីសាស្ត្រ HPLC ព្រមទាំងមានកម្រិត LOD ១.០ ng/ml និងចំណុចកាត់ផ្តាច់ (Cut off) ៨.០ ng/ml សម្រាប់គំរូចម្រាញ់សណ្តែកដី។
High-Performance Liquid Chromatography (HPLC)
ការវិភាគដោយម៉ាស៊ីន HPLC
មានភាពត្រឹមត្រូវខ្ពស់បំផុត និងអាចវាស់បរិមាណសារធាតុពុលបានយ៉ាងច្បាស់លាស់ (Quantitative Analysis) ដែលត្រូវបានទទួលស្គាល់ជាស្តង់ដារអន្តរជាតិ។ ត្រូវការពេលវេលាយូរក្នុងការវិភាគ ចំណាយថវិកាខ្ពស់លើម៉ាស៊ីន និងទាមទារអ្នកជំនាញដែលមានបច្ចេកទេសខ្ពស់ក្នុងការដំណើរការឧបករណ៍។ ត្រូវបានប្រើប្រាស់ជាវិធីសាស្ត្រស្តង់ដារយោង (Reference Method) នៅក្នុងការសិក្សានេះ ដើម្បីផ្ទៀងផ្ទាត់ និងបញ្ជាក់ពីភាពត្រឹមត្រូវនៃឧបករណ៍តេស្តរហ័ស CLFIA។

ការចំណាយលើធនធាន (Resource Cost)៖ ការអភិវឌ្ឍ និងការផលិតឧបករណ៍ធ្វើតេស្តនេះតម្រូវឱ្យមានការចំណាយទាបបំផុតត្រឹមតែ ៦៥.១៩ បាតក្នុងមួយឈុត (ដោយគិតតែលើថ្លៃវត្ថុធាតុដើម) ដែលស័ក្តិសមសម្រាប់ការផលិតក្នុងទ្រង់ទ្រាយធំ។

៣. ការពិនិត្យសម្រាប់បរិបទកម្ពុជា/អាស៊ីអាគ្នេយ៍

ភាពលំអៀងនៃទិន្នន័យ (Data Bias)៖

ការសិក្សានេះត្រូវបានធ្វើឡើងនៅក្នុងប្រទេសថៃ ដោយប្រើប្រាស់គំរូសណ្តែកដីចំនួន ២០ គំរូ (១៥ ពីទីផ្សារក្នុងស្រុក និង ៥ ពីការនាំចូលតាមច្រកព្រំដែន)។ ទោះបីជាចំនួនគំរូមានកម្រិតបន្តិច ប៉ុន្តែលក្ខខណ្ឌអាកាសធាតុ និងបរិបទកសិកម្មរវាងប្រទេសថៃ និងប្រទេសកម្ពុជាមានភាពស្រដៀងគ្នាខ្លាំង ជាពិសេសបញ្ហាសំណើមដែលជំរុញឱ្យមានការលូតលាស់នៃផ្សិត Aspergillus flavus។ ហេតុនេះ ទិន្នន័យនេះមានសារៈសំខាន់ និងអាចយកមកប្រើប្រាស់ជាមូលដ្ឋានសម្រាប់ការអនុវត្តនៅកម្ពុជា។

លទ្ធភាពនៃការអនុវត្ត (Applicability)៖

វិធីសាស្ត្រនេះមានសក្តានុពលខ្ពស់ និងអាចអនុវត្តបានយ៉ាងមានប្រសិទ្ធភាពនៅក្នុងបរិបទនៃប្រទេសកម្ពុជា។

សរុបមក ឧបករណ៍ធ្វើតេស្តនេះផ្តល់នូវដំណោះស្រាយដែលមានតម្លៃថោក និងងាយស្រួល ដែលនឹងជួយពង្រឹងយន្តការត្រួតពិនិត្យសុវត្ថិភាពចំណីអាហារនៅប្រទេសកម្ពុជាបានយ៉ាងទូលំទូលាយ។

៤. ផែនការសកម្មភាពសម្រាប់និស្សិត (Actionable Roadmap)

ដើម្បីអនុវត្តតាមការសិក្សានេះ និស្សិតគួរអនុវត្តតាមជំហានខាងក្រោម៖

  1. សិក្សាមូលដ្ឋានគ្រឹះនៃបច្ចេកទេសប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ: និស្សិតគប្បីចាប់ផ្តើមពីការសិក្សាទ្រឹស្តីទាក់ទងនឹងបច្ចេកទេស Lateral Flow Immunoassay (LFIA) និងស្វែងយល់ពីអន្តរកម្មរវាងអង់ទីហ្សែននិងអង់ទីគ័រ (Antigen-Antibody interaction) ដើម្បីយល់ដឹងពីគោលការណ៍នៃប្រតិកម្ម។
  2. អនុវត្តបច្ចេកទេសចម្រាញ់សារធាតុពុលពីគំរូ: ហ្វឹកហាត់ការទាញយកសារធាតុពុល Aflatoxin B1 ពីគំរូកសិផលជាក់ស្តែង (ឧ. សណ្តែកដី) ដោយប្រើប្រាស់សារធាតុរំលាយដូចជា Methanol ក្នុងកំហាប់ ៥០% ដើម្បីទទួលបានប្រសិទ្ធភាពទាញយកខ្ពស់ និងរហ័ស។
  3. ការវាយតម្លៃ និងការផ្ទៀងផ្ទាត់លទ្ធផល (Validation): រៀនពីរបៀបធ្វើតេស្តប្រៀបធៀបលទ្ធផលដែលទទួលបានពីឧបករណ៍តេស្តរហ័ស ជាមួយនឹងវិធីសាស្ត្រវិភាគស្តង់ដារកម្រិតខ្ពស់ដូចជា HPLC ឬប្រើប្រាស់ឧបករណ៍អានពន្លឺដូចជា RapidScan Development Starter Kit ដើម្បីគណនាកម្រិត LOD
  4. ការសាកល្បងទីវាល និងការប្រមូលមតិកែលម្អ: នាំយកឧបករណ៍គំរូដែលបានអភិវឌ្ឍរួច ទៅធ្វើការបង្ហាញនិងសាកល្បងផ្ទាល់ជាមួយមន្ត្រីអធិការកិច្ច ឬរោងចក្រក្នុងស្រុក ដើម្បីប្រមូលមតិយោបល់ (Feedback) មកកែលម្អលើភាពងាយស្រួលនៃការប្រើប្រាស់ និងប្រសិទ្ធភាពចំណាយ។

៥. វាក្យសព្ទបច្ចេកទេស (Technical Glossary)

ពាក្យបច្ចេកទេស ការពន្យល់ជាខេមរភាសា (Khmer Explanation) និយមន័យសាមញ្ញ (Simple Definition)
Competitive Lateral Flow Immunoassay / CLFIA (បច្ចេកទេសធ្វើតេស្តរហ័សបែបប្រកួតប្រជែង) ជាបច្ចេកទេសពិនិត្យរកសារធាតុ (ដូចជាជាតិពុល) ដោយផ្អែកលើប្រតិកម្មប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ (អង់ទីគ័រ និងអង់ទីហ្សែន)។ ក្នុងទម្រង់ប្រកួតប្រជែង (Competitive) ប្រសិនបើសារធាតុដែលយើងចង់រកមានវត្តមាន វានឹងរារាំងមិនឱ្យលេចចេញពណ៌នៅលើបន្ទាត់តេស្ត (Test line) នោះទេ (មានន័យថា គ្មានពណ៌ = វិជ្ជមាន)។ ដូចជាការលេងកៅអីដណ្តើមគ្នា បើមានមនុស្ស (ជាតិពុល) អង្គុយលើកៅអីរួចហើយ អ្នកផ្សេង (សារធាតុបង្កើតពណ៌) មិនអាចអង្គុយបានទេ ធ្វើឱ្យកៅអីនោះមិនលេចចេញពណ៌។
Limit of Detection / LOD (កម្រិតទាបបំផុតដែលអាចរកឃើញ) ជាកំហាប់ទាបបំផុតនៃសារធាតុណាមួយ (ឧទាហរណ៍ Aflatoxin B1) ដែលឧបករណ៍ ឬវិធីសាស្ត្រវិភាគអាចចាប់សញ្ញា និងបញ្ជាក់ថាវាពិតជាមានវត្តមាននៅក្នុងគំរូ។ ដូចជាការស្តាប់សំឡេងខ្សឹប កម្រិត LOD គឺកម្រិតសំឡេងខ្សឹបតិចបំផុតដែលត្រចៀករបស់អ្នកនៅតែអាចលឺ និងដឹងថាមានគេកំពុងនិយាយ។
High Performance Liquid Chromatography / HPLC (ការវិភាគដោយម៉ាស៊ីនក្រូម៉ាតូក្រាហ្វ៊ីរាវកម្រិតខ្ពស់) ជាម៉ាស៊ីនវិភាគស្តង់ដារកម្រិតខ្ពស់នៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ ដែលប្រើប្រាស់សម្ពាធខ្ពស់ដើម្បីបំបែក កំណត់អត្តសញ្ញាណ និងវាស់បរិមាណសារធាតុគីមីនីមួយៗនៅក្នុងល្បាយមួយយ៉ាងច្បាស់លាស់។ វាត្រូវបានប្រើជាគោលសម្រាប់ផ្ទៀងផ្ទាត់ភាពត្រឹមត្រូវនៃឧបករណ៍តេស្តរហ័ស។ ដូចជាម៉ាស៊ីនរាប់កាក់ដែលអាចបំបែកប្រភេទកាក់ (១០០រៀល, ៥០០រៀល) ដែលលាយឡំគ្នា ហើយប្រាប់ពីចំនួនកាក់នីមួយៗបានយ៉ាងត្រឹមត្រូវ។
Colloidal gold / Gold Nanoparticles (កោសិកាមាសណាណូ) ជាបណ្តុំនៃភាគល្អិតមាសដ៏តូចបំផុត (ទំហំគិតជាណាណូម៉ែត្រ) ដែលត្រូវបានប្រើប្រាស់នៅក្នុងឧបករណ៍តេស្តរហ័ស ដើម្បីចាប់យកអង់ទីគ័រ និងបង្កើតជាពណ៌ (ក្រហម ឬផ្កាឈូក) ដែលអាចមើលឃើញដោយភ្នែកទទេនៅពេលមានប្រតិកម្ម។ ដូចជាថ្នាំលាបពណ៌ដ៏តូចៗ ដែលគេបិទភ្ជាប់លើសំបុត្រប្រាប់ផ្លូវ ដើម្បីឱ្យយើងងាយស្រួលមើលឃើញសញ្ញាលេចឡើងនៅលើក្រដាសតេស្ត។
Cut off value (តម្លៃកាត់ផ្តាច់) នៅក្នុងការធ្វើតេស្តបែប Competitive នេះ វាគឺជាកម្រិតកំហាប់នៃសារធាតុពុលដែលធ្វើឱ្យបន្ទាត់តេស្ត (Test Line) បាត់ពណ៌ទាំងស្រុង ដែលជួយបញ្ជាក់យ៉ាងច្បាស់ពីលទ្ធផលវិជ្ជមាន។ ដូចជាកុងតាក់ភ្លើង ពេលកម្លាំងទឹក (ជាតិពុល) ឡើងដល់កម្រិតកំណត់មួយ កុងតាក់នឹងលោតផ្តាច់ចរន្តភ្លើង (បាត់ពណ៌) ភ្លាមៗ។
Aflatoxin B1 / AFB1 (សារធាតុពុលអាហ្វ្លាតុកស៊ីន B1) ជាប្រភេទសារធាតុពុលម្យ៉ាងដែលផលិតដោយមេរោគផ្សិត Aspergillus flavus ច្រើនកើតមានលើកសិផលដូចជាសណ្តែកដី និងពោត ដែលមានសភាពសើម ហើយវាមានហានិភ័យខ្ពស់ក្នុងការបង្កឱ្យមានជំងឺមហារីកថ្លើមដល់មនុស្ស និងសត្វ។ ដូចជាថ្នាំបំពុលលាក់មុខដែលភាយចេញពីផ្សិតដុះលើអាហារ ដែលយើងមិនអាចមើលឃើញដោយភ្នែកទទេ ឬធុំក្លិនឡើយ ប៉ុន្តែវាបំផ្លាញរាងកាយយ៉ាងសាហាវ។
Nitrocellulose Membrane / NCM (ភ្នាសនីត្រូសែលុយឡូស) ជាបន្ទះក្រដាសពិសេសនៅក្នុងឧបករណ៍តេស្តរហ័ស ដែលដើរតួជាផ្លូវសម្រាប់ឱ្យរាវ (គំរូ) ហូរឆ្លងកាត់ និងជាកន្លែងដែលគេភ្ជាប់សារធាតុប្រតិកម្ម (បន្ទាត់ C និង T) ដើម្បីចាប់យកលទ្ធផល។ ដូចជាក្រដាសជូតមាត់ដែលបឺតស្រូបទឹកឱ្យហូររាលដាលពីម្ខាងទៅម្ខាងទៀត ប៉ុន្តែគេមានបង្កប់អន្ទាក់ពណ៌នៅតាមផ្លូវដើម្បីចាប់យកសារធាតុ។

៦. ប្រធានបទពាក់ព័ន្ធ (Further Reading)

អត្ថបទដែលបានបោះពុម្ពនៅលើ KhmerResearch ដែលទាក់ទងនឹងប្រធានបទនេះ៖

ប្រធានបទ និងសំណួរស្រាវជ្រាវដែលទាក់ទងនឹងឯកសារនេះ ដែលអ្នកអាចស្វែងរកបន្ថែម៖