Original Title: Callus Induction and Plant Regeneration from Mature Embryos of Glutinous Rice (Oryza sativa L.) Cultivar TDK1
Source: li01.tci-thaijo.org
Disclaimer: Summary generated by AI based on the provided document. Please refer to the original paper for full scientific accuracy.

ការបង្កើតកាលុស និងការបណ្តុះកូនរុក្ខជាតិឡើងវិញពីអំប្រ៊ីយ៉ុងទុំនៃស្រូវដំណើប (Oryza sativa L.) ពូជ TDK1

ចំណងជើងដើម៖ Callus Induction and Plant Regeneration from Mature Embryos of Glutinous Rice (Oryza sativa L.) Cultivar TDK1

អ្នកនិពន្ធ៖ Souvanh Thadavong (Department of Agronomy, Faculty of Agriculture, Kasetsart University), Prapa Sripichitt (Department of Agronomy, Faculty of Agriculture, Kasetsart University), Wasana Wongyai (Department of Agronomy, Faculty of Agriculture, Kasetsart University), Peeranuch Jompuk (Department of Applied Radiation and Isotope, Faculty of Science, Kasetsart University)

ឆ្នាំបោះពុម្ព៖ 2002 Kasetsart J. (Nat. Sci.)

វិស័យសិក្សា៖ Agricultural Biotechnology

១. សេចក្តីសង្ខេបប្រតិបត្តិ (Executive Summary)

បញ្ហា (The Problem)៖ ឯកសារនេះដោះស្រាយបញ្ហានៃការស្វែងរកលក្ខខណ្ឌ in vitro ល្អបំផុតសម្រាប់ការបង្កើតកាលុស និងការបណ្តុះកូនរុក្ខជាតិឡើងវិញពីគ្រាប់ពូជស្រូវដំណើប TDK1 ដើម្បីគាំទ្រដល់កម្មវិធីបង្កាត់ពូជតាមរយៈជីវបច្ចេកវិទ្យា។

វិធីសាស្ត្រ (The Methodology)៖ ការសិក្សានេះបានធ្វើការពិសោធន៍លើការបណ្តុះជាលិកាគ្រាប់ស្រូវចាស់ទុំនៅក្នុងមជ្ឈដ្ឋានដែលមានផ្ទុកសារធាតុចិញ្ចឹម និងអ័រម៉ូនលូតលាស់ផ្សេងៗគ្នាក្រោមលក្ខខណ្ឌពន្លឺខុសគ្នា។

លទ្ធផលសំខាន់ៗ (The Verdict)៖

២. ការវិភាគលើប្រសិទ្ធភាព និងដែនកំណត់ (Performance & Constraints)

វិធីសាស្ត្រ (Method) គុណសម្បត្តិ (Pros) គុណវិបត្តិ (Cons) លទ្ធផលគន្លឹះ (Key Result)
MS medium + 2,4-D (Control)
មជ្ឈដ្ឋាន MS + 2,4-D (គ្មានសារធាតុសរីរាង្គបន្ថែម)
ងាយស្រួលក្នុងការរៀបចំ និងចំណាយថវិកាតិចសម្រាប់ការបណ្តុះ។ អត្រានៃការកកើតកាលុស និងទំហំកាលុសតូចជាងបើធៀបនឹងការប្រើសារធាតុបន្ថែម។ អត្រាកកើតកាលុស ៨៨.១៤% និងមានទំហំមធ្យម ៤.៣៤ មីលីម៉ែត្រ។
MS medium + 2,4-D + L-proline
មជ្ឈដ្ឋាន MS + 2,4-D បន្ថែម L-proline
ផ្តល់អត្រាកកើតកាលុសខ្ពស់បំផុត និងបានកាលុសទំហំធំ ដែលជាប្រភេទកាលុសងាយកកើតជាអំប្រ៊ីយ៉ុង (Embryogenic callus)។ ត្រូវការទិញអាស៊ីតអាមីណេ (L-proline) បន្ថែម ដែលបង្កើនការចំណាយលើសារធាតុគីមីបន្តិចបន្តួច។ អត្រាកកើតកាលុសខ្ពស់បំផុតដល់ ៩៦.៩១% និងមានទំហំធំ ៦.០២ មីលីម៉ែត្រ។
Regeneration without dehydration
ការបណ្តុះកូនរុក្ខជាតិដោយមិនសម្ងួតកាលុស
ចំណេញពេលវេលា ដោយមិនចាំបាច់រង់ចាំ ៧ ថ្ងៃសម្រាប់ការសម្ងួត។ អត្រាដុះពន្លកមានកម្រិតទាបខ្លាំង ដោយសារកាលុសមានផ្ទុកជាតិទឹកច្រើនរំខានដល់ដំណើរការលូតលាស់។ អត្រាដុះពន្លកខ្ពស់បំផុតត្រឹមតែ ៥% និងទទួលបាន ១.៦៦ ពន្លក/កាលុស។
Regeneration with light dehydration
ការបណ្តុះកូនរុក្ខជាតិដោយសម្ងួតកាលុសក្រោមពន្លឺរយៈពេល ៧ ថ្ងៃ
ជំរុញឱ្យកាលុសស្រូបយកសារធាតុចិញ្ចឹម និងទឹកបានល្អពេលប្តូរទៅមជ្ឈដ្ឋានថ្មី ដែលផ្តល់អត្រាដុះពន្លកខ្ពស់បំផុត។ ត្រូវការពេលវេលាបន្ថែម ៧ ថ្ងៃ និងការគ្រប់គ្រងពន្លឺឲ្យបានត្រឹមត្រូវមុនពេលប្តូរមជ្ឈដ្ឋាន។ អត្រាដុះពន្លកកើនដល់ ៤៥% និងទទួលបាន ១៥ ពន្លក/កាលុស (ពេលប្រើជាមួយ Casein hydrolysate)។

ការចំណាយលើធនធាន (Resource Cost)៖ ការអនុវត្តបច្ចេកទេសនេះទាមទារឱ្យមានមន្ទីរពិសោធន៍បណ្តុះជាលិការុក្ខជាតិ (Plant Tissue Culture Lab) ដែលមានឧបករណ៍ សារធាតុគីមីស្តង់ដារ និងការគ្រប់គ្រងបរិស្ថានបានល្អ។

៣. ការពិនិត្យសម្រាប់បរិបទកម្ពុជា/អាស៊ីអាគ្នេយ៍

ភាពលំអៀងនៃទិន្នន័យ (Data Bias)៖

ការសិក្សានេះត្រូវបានធ្វើឡើងនៅសាកលវិទ្យាល័យ Kasetsart ប្រទេសថៃ ដោយប្រើប្រាស់ពូជស្រូវដំណើបឡាវ Oryza sativa ពូជ TDK1។ ទោះបីជាអាកាសធាតុ និងប្រភេទស្រូវមានភាពស្រដៀងគ្នានឹងប្រទេសកម្ពុជាក៏ដោយ ក៏ប្រតិកម្មនៃការបណ្តុះជាលិកាអាចប្រែប្រួលទៅតាមសេនេទិច (Genotype-specific)។ ដូច្នេះ ការយកមកអនុវត្តលើពូជស្រូវក្នុងស្រុករបស់កម្ពុជា អាចនឹងត្រូវការការសិក្សាកែសម្រួលកំហាប់អ័រម៉ូនឡើងវិញបន្តិចបន្តួច។

លទ្ធភាពនៃការអនុវត្ត (Applicability)៖

ពិធីការនៃការបណ្តុះជាលិកា និងបង្កើតកូនរុក្ខជាតិឡើងវិញនេះ មានអត្ថប្រយោជន៍យ៉ាងខ្លាំងសម្រាប់កម្មវិធីបង្កាត់ពូជ និងការកែលម្អពូជស្រូវនៅប្រទេសកម្ពុជា។

ជារួម ការរៀនសូត្រ និងអនុវត្តបច្ចេកទេសនេះ នឹងពន្លឿនសមត្ថភាពស្រាវជ្រាវជីវបច្ចេកវិទ្យាដំណាំនៅកម្ពុជា ជួយឱ្យយើងមានសមត្ថភាពបង្កើតពូជស្រូវថ្មីៗដែលផ្តល់ទិន្នផលខ្ពស់ និងធន់នឹងសត្វល្អិតដោយខ្លួនឯង។

៤. ផែនការសកម្មភាពសម្រាប់និស្សិត (Actionable Roadmap)

ដើម្បីអនុវត្តតាមការសិក្សានេះ និស្សិតគួរអនុវត្តតាមជំហានខាងក្រោម៖

  1. រៀបចំមន្ទីរពិសោធន៍ និងមជ្ឈដ្ឋានបណ្តុះ: និស្សិតត្រូវរៀបចំសម្ភារៈ និងសម្លាប់មេរោគដោយប្រើ Autoclave រួចលាយមជ្ឈដ្ឋាន MS Medium ដោយបន្ថែម 2 mg/l 2,4-D និង 500 mg/l L-proline សម្រាប់វគ្គបណ្តុះកាលុស (Callus Induction) ហើយសារេកម្រិត pH ឲ្យបាន 5.8។
  2. សម្លាប់មេរោគលើគ្រាប់ពូជ និងបណ្តុះកាលុស: អនុវត្តបច្ចេកទេស Aseptic Technique ក្នុងទូ Laminar Flow Hood ដោយសម្លាប់មេរោគលើគ្រាប់ពូជស្រូវជាមួយ Ethanol 70% និង Clorox 15% រួចដាក់បណ្តុះលើមជ្ឈដ្ឋានដែលបានរៀបចំ និងរក្សាទុកក្រោមពន្លឺរយៈពេល ៤ សប្តាហ៍នៅសីតុណ្ហភាព 25°C។
  3. ការសម្ងួតកាលុស (Dehydration Treatment): ក្រោយ ៤ សប្តាហ៍ ត្រូវកាត់កាលុសជាចំណិតតូចៗ (ប្រមាណ 0.5 mm) ហើយយកទៅដាក់លើក្រដាសចម្រោះ (Filter paper) ក្នុងចាន Petridish បិទជិត ដើម្បីសម្ងួតក្រោមពន្លឺរយៈពេល ៧ ថ្ងៃ។
  4. ការបណ្តុះពន្លក និងឫស (Shoot and Root Regeneration): ប្តូរកាលុសដែលសម្ងួតរួចទៅមជ្ឈដ្ឋានថ្មី (MS + 1 mg/l IAA + 4 mg/l BA + 800 mg/l Casein hydrolysate) រហូតដល់ចេញពន្លក។ បន្ទាប់មកកាត់ពន្លកទៅបណ្តុះឫសក្នុងមជ្ឈដ្ឋាន MS + 1 mg/l NAA
  5. ការបន្ស៊ាំកូនរុក្ខជាតិទៅមជ្ឈដ្ឋានខាងក្រៅ (Acclimatization): នៅពេលកូនស្រូវដុះឫសពេញលេញ (១០០%) ត្រូវយកវាចេញពីដប លាងសម្អាតមជ្ឈដ្ឋានចេញពីឫសដោយប្រុងប្រយ័ត្ន រួចយកទៅដាំក្នុងផើងដីដែលមានជីជាតិ និងរក្សាទុកក្នុងផ្ទះកញ្ចក់ (Greenhouse) រហូតដល់វាលូតលាស់រឹងមាំ និងផ្តល់គ្រាប់ចំណុះធម្មតា។

៥. វាក្យសព្ទបច្ចេកទេស (Technical Glossary)

ពាក្យបច្ចេកទេស ការពន្យល់ជាខេមរភាសា (Khmer Explanation) និយមន័យសាមញ្ញ (Simple Definition)
Callus (កាលុស) ជាលិការុក្ខជាតិដែលផ្សំឡើងពីកោសិកាមិនទាន់បែងចែកមុខងារច្បាស់លាស់ ដែលកកើតឡើងនៅពេលរុក្ខជាតិរងរបួស ឬត្រូវបានដាំដុះក្នុងមជ្ឈដ្ឋានសិប្បនិម្មិតដែលមានអ័រម៉ូនជំនួយ។ ដូចជាដុំសាច់ខ្ចីដែលដុះចេញមកពេលយើងមុតដៃ មុនពេលវាប្រែទៅជាស្បែកធម្មតាវិញ។
Plant Regeneration (ការបណ្តុះកូនរុក្ខជាតិឡើងវិញ) ដំណើរការនៃការលូតលាស់ពីកោសិកា ឬកាលុសតែមួយ ឲ្យក្លាយទៅជាកូនរុក្ខជាតិពេញលេញដែលមានពន្លក និងឫសនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍។ ដូចជាការយកដុំសាច់តូចមួយរបស់សត្វចចាម ទៅបណ្តុះឲ្យកើតជាសត្វចចាមមួយក្បាលពេញលេញ។
In vitro (ក្នុងកែវពិសោធន៍) ការធ្វើពិសោធន៍ ឬការបណ្តុះជាលិកានៅក្នុងកែវ ថង់ ឬចានពិសោធន៍ ដែលមានការគ្រប់គ្រងមេរោគ សីតុណ្ហភាព និងចំណីអាហារយ៉ាងតឹងរ៉ឹង ជាជាងការដាំក្នុងធម្មជាតិ។ ដូចជាការចិញ្ចឹមកូនក្នុងទូកញ្ចក់នៅមន្ទីរពេទ្យ ដែលយើងគ្រប់គ្រងអាកាសធាតុ និងចំណីអាហារបាន ១០០%។
Somatic embryogenesis (កំណរកំណើតអំប្រ៊ីយ៉ុងសូទិច) ដំណើរការដែលកោសិការាងកាយធម្មតារបស់រុក្ខជាតិ (មិនមែនកោសិកាបន្តពូជ) វិវឌ្ឍទៅជាអំប្រ៊ីយ៉ុង រួចលូតលាស់ជាកូនរុក្ខជាតិថ្មីក្នុងពេលតែមួយ។ ដូចជាការយកកោសិកាស្បែកមួយមករៀបចំកម្មវិធីឡើងវិញ ឲ្យក្លាយជាអំប្រ៊ីយ៉ុងទារកដោយមិនបាច់មានមេជីវិត។
Organogenesis (ការកកើតសរីរាង្គ) ដំណើរការដែលកាលុសចាប់ផ្តើមបង្កើតសរីរាង្គផ្សេងៗដាច់ដោយឡែកពីគ្នា ដូចជាដុះពន្លកមុន រួចទើបដុះឫសតាមក្រោយ ដោយអាស្រ័យលើកម្រិតអ័រម៉ូន។ ដូចជាជាងស្ថាបត្យករសាងសង់ផ្ទះ ដោយធ្វើដំបូលមុន រួចទើបធ្វើគ្រឹះតាមក្រោយ។
Dehydration (ការសម្ងួត) ការកាត់បន្ថយជាតិទឹកចេញពីកាលុស ដើម្បីឲ្យកោសិកាឈប់សម្រាកមួយរយៈ មុនពេលស្រូបយកទឹក និងសារធាតុចិញ្ចឹមឡើងវិញយ៉ាងខ្លាំងក្លា ដែលជួយជំរុញការលូតលាស់ពន្លក។ ដូចជាការបង្អត់ទឹកដើមផ្កាក្រដាសមួយរយៈ ដើម្បីឲ្យវាភ្ញាក់ផ្អើល និងបញ្ចេញផ្កាច្រើននៅពេលយើងស្រោចទឹកវិញ។
Murashige and Skoog (MS) medium (មជ្ឈដ្ឋាន MS) ប្រភេទមជ្ឈដ្ឋានសារធាតុចិញ្ចឹមស្តង់ដារដែលគេនិយមប្រើបំផុតសម្រាប់ការបណ្តុះជាលិការុក្ខជាតិ ដែលមានផ្ទុកសារធាតុរ៉ែ វីតាមីន និងស្ករចាំបាច់។ ដូចជារូបមន្តទឹកដោះគោម្សៅសម្រាប់ទារក ដែលមានផ្ទុកវីតាមីន និងរ៉ែគ្រប់មុខដើម្បីឲ្យទារកលូតលាស់បានល្អបំផុត។

៦. ប្រធានបទពាក់ព័ន្ធ (Further Reading)

អត្ថបទដែលបានបោះពុម្ពនៅលើ KhmerResearch ដែលទាក់ទងនឹងប្រធានបទនេះ៖

ប្រធានបទ និងសំណួរស្រាវជ្រាវដែលទាក់ទងនឹងឯកសារនេះ ដែលអ្នកអាចស្វែងរកបន្ថែម៖