Original Title: Embryogenesis and Plant Regeneration from Immature cotyledon Culture Soybean
Source: li01.tci-thaijo.org
Disclaimer: Summary generated by AI based on the provided document. Please refer to the original paper for full scientific accuracy.

ការកកើតអំប្រ៊ីយ៉ុង និងការបណ្ដុះកូនរុក្ខជាតិឡើងវិញពីការបណ្ដុះកោសិកាស្លឹកកញ្ចុំដំបូងរបស់សណ្តែកសៀង

ចំណងជើងដើម៖ Embryogenesis and Plant Regeneration from Immature cotyledon Culture Soybean

អ្នកនិពន្ធ៖ Sontichai Chanprame (Department of Agronomy, Faculty of Agriculture, Kasetsart University), Rachanee Therapotchanart (Department of Agronomy, Faculty of Agriculture, Kasetsart University), Peerasak Srinives (Department of Agronomy, Faculty of Agriculture, Kasetsart University)

ឆ្នាំបោះពុម្ព៖ 1990, Agriculture and Natural Resources

វិស័យសិក្សា៖ Plant Biotechnology

១. សេចក្តីសង្ខេបប្រតិបត្តិ (Executive Summary)

បញ្ហា (The Problem)៖ ការស្រាវជ្រាវនេះស្វែងរកលក្ខខណ្ឌមជ្ឈដ្ឋានល្អបំផុតសម្រាប់ការកកើតអំប្រ៊ីយ៉ូ (Embryogenesis) និងការលូតលាស់ជាកូនរុក្ខជាតិឡើងវិញ ពីការបណ្ដុះជាលិកាស្លឹកកញ្ចុំដំបូងរបស់សណ្តែកសៀង (Glycine max) ។

វិធីសាស្ត្រ (The Methodology)៖ អ្នកស្រាវជ្រាវបានយកស្លឹកកញ្ចុំដំបូងរបស់សណ្តែកសៀងដែលមានទំហំខុសៗគ្នា ទៅបណ្ដុះក្នុងមជ្ឈដ្ឋានដែលមានសារធាតុចិញ្ចឹម និងអរម៉ូនលូតលាស់ក្នុងកម្រិតខុសៗគ្នា។

លទ្ធផលសំខាន់ៗ (The Verdict)៖

២. ការវិភាគលើប្រសិទ្ធភាព និងដែនកំណត់ (Performance & Constraints)

វិធីសាស្ត្រ (Method) គុណសម្បត្តិ (Pros) គុណវិបត្តិ (Cons) លទ្ធផលគន្លឹះ (Key Result)
Modified MS Medium + 7.5-10.0 mg/L NAA + 15 g/L Sucrose
មជ្ឈដ្ឋាន MS កែច្នៃបន្ថែម NAA (៧,៥-១០,០ ម.ក/លីត្រ) និងស៊ុយក្រូស (១៥ ក្រាម/លីត្រ)
ជំរុញការកកើតអំប្រ៊ីយ៉ូ (Embryoid) បានល្អបំផុត និងមានទំហំធំល្អ។ វាមានភាពស័ក្តិសមបំផុតសម្រាប់ស្លឹកកញ្ចុំដែលមានទំហំចន្លោះពី ៣ ទៅ ៥ មីលីម៉ែត្រ។ ទាមទារការគ្រប់គ្រងកំហាប់អរម៉ូន និងទំហំស្លឹកកញ្ចុំឱ្យបានច្បាស់លាស់។ ប្រសិនបើកំហាប់ប្រែប្រួល វានឹងកាត់បន្ថយប្រសិទ្ធភាពនៃការបណ្ដុះ។ បង្កើតអំប្រ៊ីយ៉ូបានចំនួនច្រើនបំផុត ជាពិសេសលើសណ្តែកសៀងពូជ SJ4 (ទទួលបាន ១៣៥ អំប្រ៊ីយ៉ូ ពី ១៨៨ ស្លឹកកញ្ចុំ)។
Modified MS Medium + High NAA (>10 mg/L) or High Sucrose (>15 g/L)
មជ្ឈដ្ឋាន MS កែច្នៃបន្ថែម NAA កំហាប់ខ្ពស់ (>១០ ម.ក/លីត្រ) ឬស៊ុយក្រូសកំហាប់ខ្ពស់ (>១៥ ក្រាម/លីត្រ)
អាចជំរុញការបង្កើតជាកោសិកាពក (Callus formation) ក្នុងកម្រិតមធ្យមទៅល្អខ្លាំង ដែលស័ក្តិសមសម្រាប់គោលបំណងស្រាវជ្រាវផ្សេង។ ធ្វើឱ្យអត្រាកកើតអំប្រ៊ីយ៉ូធ្លាក់ចុះយ៉ាងខ្លាំង និងបណ្តាលឱ្យកោសិកាប្រែពណ៌ត្នោតមិនអាចលូតលាស់ជាកូនរុក្ខជាតិបាន។ កំហាប់ស្ករខ្ពស់ពេកបង្កឱ្យមានបាតុភូត Plasmolysis។ ចំនួនអំប្រ៊ីយ៉ូថយចុះយ៉ាងគំហុក (ឧទាហរណ៍ ការប្រើ NAA កំហាប់ 15 mg/L ទទួលបានអំប្រ៊ីយ៉ូត្រឹមតែ ៣ ប៉ុណ្ណោះ)។
MS Medium + Casein Hydrolysate (200-1000 mg/L)
មជ្ឈដ្ឋាន MS បន្ថែមអាស៊ីតអាមីណេ (Casein Hydrolysate ២០០-១០០០ ម.ក/លីត្រ)
អាចផ្តល់ប្រភពអាសូតបន្ថែមសម្រាប់ការលូតលាស់កោសិការុក្ខជាតិក្នុងលក្ខខណ្ឌស្រាវជ្រាវមួយចំនួន។ មិនមានឥទ្ធិពលវិជ្ជមានច្បាស់លាស់ក្នុងការកកើតអំប្រ៊ីយ៉ូសម្រាប់សណ្តែកសៀងនោះទេ ថែមទាំងធ្វើឱ្យអំប្រ៊ីយ៉ូមានទំហំតូច និងពន្យឺតការលូតលាស់។ មិនបង្ហាញពីការកើនឡើងនៃអត្រាបង្កើតអំប្រ៊ីយ៉ូទេ បើធៀបនឹងមជ្ឈដ្ឋានដែលមិនបានបន្ថែម Casein Hydrolysate។

ការចំណាយលើធនធាន (Resource Cost)៖ ការសិក្សានេះទាមទារមន្ទីរពិសោធន៍បណ្ដុះជាលិការុក្ខជាតិ (Plant Tissue Culture Lab) ដែលមានបំពាក់ឧបករណ៍ និងសារធាតុគីមីស្តង់ដារសម្រាប់ធ្វើប្រតិបត្តិការក្នុងលក្ខខណ្ឌគ្មានមេរោគ។

៣. ការពិនិត្យសម្រាប់បរិបទកម្ពុជា/អាស៊ីអាគ្នេយ៍

ភាពលំអៀងនៃទិន្នន័យ (Data Bias)៖

ការសិក្សានេះត្រូវបានធ្វើឡើងនៅសាកលវិទ្យាល័យ Kasetsart ប្រទេសថៃ ក្នុងឆ្នាំ ១៩៩០ ដោយផ្អែកលើពូជសណ្តែកសៀងជាក់លាក់ចំនួន ៤ ពូជ (SJ4, SJ5, NW1, MTD22)។ ទោះបីជាទិន្នន័យនេះមានអាយុកាលចាស់ និងផ្អែកលើពូជរបស់ប្រទេសថៃក៏ដោយ ប៉ុន្តែវាមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ប្រទេសកម្ពុជា ព្រោះប្រទេសទាំងពីរមានអាកាសធាតុស្រដៀងគ្នា ហើយបច្ចេកទេសនេះអាចធ្វើជាមូលដ្ឋានក្នុងការកែលម្អពូជសណ្តែកសៀងក្នុងស្រុកកម្ពុជាបាន។

លទ្ធភាពនៃការអនុវត្ត (Applicability)៖

វិធីសាស្ត្របណ្ដុះជាលិកានេះមានសក្តានុពលខ្ពស់សម្រាប់វិស័យកសិកម្មនៅកម្ពុជា ក្នុងការបង្កើតពូជរុក្ខជាតិថ្មីៗ និងការផលិតកូនរុក្ខជាតិដែលគ្មានជំងឺ។

សរុបមក ការអនុវត្តបច្ចេកទេសនេះអាចជួយជំរុញការស្រាវជ្រាវ និងការអភិវឌ្ឍពូជសណ្តែកសៀងនៅកម្ពុជាឱ្យមានភាពប្រកួតប្រជែងខ្ពស់ និងឆ្លើយតបទៅនឹងតម្រូវការទីផ្សារ និងការប្រែប្រួលអាកាសធាតុ។

៤. ផែនការសកម្មភាពសម្រាប់និស្សិត (Actionable Roadmap)

ដើម្បីអនុវត្តតាមការសិក្សានេះ និស្សិតគួរអនុវត្តតាមជំហានខាងក្រោម៖

  1. ការរៀបចំមន្ទីរពិសោធន៍ និងការសម្លាប់មេរោគ: និស្សិតត្រូវរៀបចំមន្ទីរពិសោធន៍ដោយអនុវត្តក្នុងទូ Laminar Airflow និងរៀនពីបច្ចេកទេសសម្លាប់មេរោគលើផ្ទៃគ្រាប់សណ្តែកសៀងខ្ចី ដោយប្រើប្រាស់សូលុយស្យុង Clorox 10% ត្រាំរយៈពេល ១៥ នាទី រួចលាងសម្អាតដោយទឹកចម្រោះ (Sterilized Distilled Water) ចំនួន ៣ ដង។
  2. ការរៀបចំមជ្ឈដ្ឋានចិញ្ចឹម (Culture Medium): រៀបចំមជ្ឈដ្ឋាន MS Basic Medium ដោយបន្ថែមវីតាមីន B-5, អរម៉ូនលូតលាស់ NAA កំហាប់ចន្លោះពី ៧,៥ ទៅ ១០,០ ម.ក/លីត្រ និង Sucrose ១៥ ក្រាម/លីត្រ រួចយកទៅសម្លាប់មេរោគក្នុងម៉ាស៊ីន Autoclave មុននឹងចាក់ចូលទៅក្នុងដបកែវ។
  3. ការកាត់ និងបណ្ដុះកោសិកាស្លឹកកញ្ចុំ (Cotyledon Culture): ធ្វើការវះកាត់បកសំបកគ្រាប់យកអំប្រ៊ីយ៉ុងចេញដោយប្រុងប្រយ័ត្នក្រោមទូគ្មានមេរោគ ហើយជ្រើសរើសយកស្លឹកកញ្ចុំដំបូងដែលមានទំហំចន្លោះពី ៣ ទៅ ៥ មីលីម៉ែត្រ ទៅដាក់បណ្ដុះក្នុងដបមជ្ឈដ្ឋានចិញ្ចឹមដែលបានរៀបចំរួច។
  4. ការថែរក្សា និងការតាមដានការលូតលាស់: រក្សាទុកដបបណ្ដុះនៅក្នុងបន្ទប់ Incubator room ដែលមានពន្លឺ 1000 lux រយៈពេល ២៣ ម៉ោងក្នុងមួយថ្ងៃ ក្នុងសីតុណ្ហភាព ២៧±១ °C និងត្រូវកត់ត្រាការវិវត្តនៃការកកើត Embryoid រៀងរាល់សប្តាហ៍រយៈពេល ៤ សប្តាហ៍។
  5. ការបណ្ដុះជាកូនរុក្ខជាតិ និងការបន្សាំ (Acclimatization): នៅពេល Embryoid បញ្ចេញឫស និងលូតលាស់ជាកូនរុក្ខជាតិ (Plantlets) គ្រប់គ្រាន់ ត្រូវប្តូរពួកវាទៅដាំក្នុងល្បាយដីដែលបានសម្លាប់មេរោគ រួចបន្សាំវានៅក្នុងផ្ទះកញ្ចក់ (Greenhouse) មុននឹងយកទៅដាំក្នុងចម្ការសាកល្បង។

៥. វាក្យសព្ទបច្ចេកទេស (Technical Glossary)

ពាក្យបច្ចេកទេស ការពន្យល់ជាខេមរភាសា (Khmer Explanation) និយមន័យសាមញ្ញ (Simple Definition)
Embryogenesis (ការកកើតអំប្រ៊ីយ៉ូ) ដំណើរការដែលកោសិការុក្ខជាតិ (ដូចជាស្លឹកកញ្ចុំ) ត្រូវបានជំរុញឱ្យលូតលាស់ទៅជាអំប្រ៊ីយ៉ូ (Embryoid) នៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ ដែលអាចលូតលាស់បន្តជាកូនរុក្ខជាតិថ្មីបាន ដោយមិនបាច់ឆ្លងកាត់ការបង្កាត់ពូជតាមធម្មជាតិ។ វាប្រៀបដូចជាការយកបំណែកតូចមួយនៃរុក្ខជាតិទៅ 'ក្លូន' ឱ្យក្លាយជាគ្រាប់ពូជសិប្បនិម្មិតដែលអាចដុះជាដើមថ្មី។
Cotyledon (ស្លឹកកញ្ចុំដំបូង) ជាផ្នែកមួយនៃអំប្រ៊ីយ៉ូនៅក្នុងគ្រាប់ពូជ ដែលមានតួនាទីស្តុកទុកអាហារសម្រាប់ចិញ្ចឹមកូនរុក្ខជាតិនៅពេលវាចាប់ផ្តើមដុះពន្លកដំបូង។ ក្នុងការស្រាវជ្រាវនេះ គេយកវាមកធ្វើជាជាលិកាគោលសម្រាប់បណ្ដុះដើម្បីបង្កើតកូនរុក្ខជាតិថ្មី។ ដូចជាថង់អាហារបម្រុងដែលភ្ជាប់មកជាមួយទារក (កូនរុក្ខជាតិ) ដើម្បីជួយឱ្យវាមានកម្លាំងលូតលាស់នៅថ្ងៃដំបូង។
MS Medium / Murashige and Skoog (មជ្ឈដ្ឋាន MS) ជាល្បាយសារធាតុចិញ្ចឹមស្តង់ដារនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ ដែលមានផ្ទុកម៉ាក្រូសារធាតុ មីក្រូសារធាតុ និងវីតាមីនចាំបាច់ ដើម្បីទ្រទ្រង់ការលូតលាស់របស់កោសិការុក្ខជាតិនៅក្នុងដបកែវក្នុងលក្ខខណ្ឌគ្មានមេរោគ។ វាប្រៀបដូចជាទឹកដោះគោម្សៅដែលមានផ្ទុកជីវជាតិគ្រប់គ្រាន់សម្រាប់ចិញ្ចឹមកោសិការុក្ខជាតិជំនួសឱ្យដី។
NAA / Naphthaleneacetic acid (អរម៉ូន NAA) ជាប្រភេទអរម៉ូនលូតលាស់សំយោគប្រភេទ Auxin ដែលត្រូវបានគេប្រើប្រាស់ជាទូទៅក្នុងការបណ្ដុះជាលិកា ដើម្បីជំរុញការបែងចែកកោសិកា ការបង្កើតឫស និងការកកើតអំប្រ៊ីយ៉ូ។ ដូចជាថ្នាំប៉ូវដែលបញ្ជាឱ្យកោសិការុក្ខជាតិប្រញាប់បំបែកខ្លួន និងបង្កើតជាឫសឬអំប្រ៊ីយ៉ូថ្មី។
Callus formation (ការកកើតកោសិកាពក) ជាបណ្តុំកោសិកាដែលគ្មានទម្រង់ច្បាស់លាស់ និងមិនទាន់មានមុខងារជាក់លាក់ ដែលកកើតឡើងនៅពេលកោសិការុក្ខជាតិរងរបួស ឬត្រូវបានជំរុញដោយអរម៉ូនក្នុងកម្រិតមិនសមស្រប មុននឹងវាអាចវិវឌ្ឍទៅជាសរីរាង្គផ្សេងៗ។ ដូចជាសន្លាកដំបៅដែលសាច់ដុះឡើងរដិបរដុប មុនពេលវាប្រែក្លាយទៅជាសរីរាង្គថ្មី ឬឫស។
Plasmolysis (បាតុភូតបាត់បង់ជាតិទឹកពីកោសិកា) បាតុភូតដែលទឹកសាយភាយចេញពីក្នុងកោសិការុក្ខជាតិទៅកាន់មជ្ឈដ្ឋានខាងក្រៅ (ដោយសារខាងក្រៅមានកំហាប់សារធាតុរលាយ ដូចជាស្ករ ខ្ពស់ជាង) ដែលធ្វើឱ្យកោសិកាស្វិត និងអាចងាប់បាន។ ដូចជាការយកបន្លែស្រស់ទៅត្រាំក្នុងទឹកអំបិលឬទឹកស្ករ ដែលធ្វើឱ្យទឹកចេញពីបន្លែ ហើយបន្លែប្រែជាស្វិត។
Casein hydrolysate (អាស៊ីតអាមីណេ Casein hydrolysate) ជាល្បាយនៃអាស៊ីតអាមីណេដែលទទួលបានពីការបំបែកប្រូតេអ៊ីនទឹកដោះគោ ដែលជារឿយៗត្រូវបានគេប្រើប្រាស់ជាប្រភពអាសូតសរីរាង្គបន្ថែមនៅក្នុងមជ្ឈដ្ឋានបណ្ដុះជាលិកា ដើម្បីជួយបង្កើនការលូតលាស់។ ដូចជាការផ្តល់ប្រូតេអ៊ីនបំប៉នសាច់ដុំដល់អ្នកហាត់ប្រាណ ដើម្បីឱ្យកោសិការុក្ខជាតិមានប្រភពអាហារបន្ថែម។

៦. ប្រធានបទពាក់ព័ន្ធ (Further Reading)

អត្ថបទដែលបានបោះពុម្ពនៅលើ KhmerResearch ដែលទាក់ទងនឹងប្រធានបទនេះ៖

ប្រធានបទ និងសំណួរស្រាវជ្រាវដែលទាក់ទងនឹងឯកសារនេះ ដែលអ្នកអាចស្វែងរកបន្ថែម៖