Original Title: การจัดจำแนกชนิดเชื้อซานโทโมนาสสาเหตุโรคใบจุดมะเขือเทศและพริกในประเทศไทย (Characterization of Xanthomonas causing of Bacterial Leaf Spot of Tomato and Pepper in Thailand)
Source: doi.org/10.14456/thaidoa-agres.2020.7
Disclaimer: Summary generated by AI based on the provided document. Please refer to the original paper for full scientific accuracy.

ការកំណត់លក្ខណៈបាក់តេរី Xanthomonas ដែលបង្កជំងឺអុចស្លឹកលើប៉េងប៉ោះ និងម្ទេសនៅប្រទេសថៃ

ចំណងជើងដើម៖ การจัดจำแนกชนิดเชื้อซานโทโมนาสสาเหตุโรคใบจุดมะเขือเทศและพริกในประเทศไทย (Characterization of Xanthomonas causing of Bacterial Leaf Spot of Tomato and Pepper in Thailand)

អ្នកនិពន្ធ៖ Santipong Sitthitanasin (Department of Plant Pathology, Faculty of Agriculture at Kamphaeng Sean, Kasetsart University), Chanyanut Korakngam, Tippawan Kanhayart, Nuttima Kositcharoenkul, Sujin Patarapuwadol, Wichai Kositratana, Jutatape Watcharachaiyakup

ឆ្នាំបោះពុម្ព៖ 2020, Thai Agricultural Research Journal

វិស័យសិក្សា៖ Plant Pathology

១. សេចក្តីសង្ខេបប្រតិបត្តិ (Executive Summary)

បញ្ហា (The Problem)៖ ជំងឺអុចស្លឹកបាក់តេរីគឺជាការគំរាមកំហែងយ៉ាងធ្ងន់ធ្ងរដល់ឧស្សាហកម្មគ្រាប់ពូជប៉េងប៉ោះ និងម្ទេស ហើយការធ្វើចំណាត់ថ្នាក់ប្រភេទបាក់តេរី Xanthomonas ឡើងវិញទាមទារឱ្យមានការកំណត់អត្តសញ្ញាណយ៉ាងច្បាស់លាស់នៅក្នុងប្រទេសថៃ។

វិធីសាស្ត្រ (The Methodology)៖ ការសិក្សានេះបានប្រមូល និងវិភាគបាក់តេរីចំនួន៣៨ប្រភេទ (isolates) ដោយផ្អែកលើលក្ខណៈរូបសាស្ត្រ សរីរវិទ្យា ជីវគីមី និងបច្ចេកទេសម៉ូលេគុល ដើម្បីកំណត់ប្រភេទឱ្យបានត្រឹមត្រូវ។

លទ្ធផលសំខាន់ៗ (The Verdict)៖

២. ការវិភាគលើប្រសិទ្ធភាព និងដែនកំណត់ (Performance & Constraints)

វិធីសាស្ត្រ (Method) គុណសម្បត្តិ (Pros) គុណវិបត្តិ (Cons) លទ្ធផលគន្លឹះ (Key Result)
Multilocus Sequence Analysis (MLSA)
ការវិភាគតំណលំដាប់ហ្សែនចម្រុះ (MLSA) នៃហ្សែន gyrB, efp, dnaK, និង atpD
មានភាពជាក់លាក់ និងត្រឹមត្រូវខ្ពស់បំផុតក្នុងការកំណត់អត្តសញ្ញាណប្រភេទបាក់តេរី ទោះបីជាការធ្វើតេស្ត PCR បរាជ័យក៏ដោយ។ ចំណាយថវិកាច្រើន ចំណាយពេលយូរ និងទាមទារសេវាកម្មអានលំដាប់ហ្សែន (Sequencing) ព្រមទាំងចំណេះដឹងផ្នែកជីវព័ត៌មានវិទ្យា (Bioinformatics)។ កំណត់អត្តសញ្ញាណបានយ៉ាងច្បាស់នូវបាក់តេរី X. perforans ចំនួន៨ប្រភេទ និង X. euvesicatoria ចំនួន១០ប្រភេទ។
Species-specific PCR
ប្រតិកម្មច្រវ៉ាក់ប៉ូលីមេរ៉ាស (PCR) ដោយប្រើប្រ៊ីម័រជាក់លាក់
ផ្តល់លទ្ធផលលឿន ចំណាយតិចជាង MLSA និងងាយស្រួលអនុវត្តសម្រាប់ការត្រួតពិនិត្យសំណាកទ្រង់ទ្រាយធំ។ អាចផ្តល់លទ្ធផលអវិជ្ជមានមិនពិត (False negative) ប្រសិនបើហ្សែនរបស់បាក់តេរីក្នុងតំបន់មានការបម្រែបម្រួល ដូចដែលបានកើតឡើងចំពោះប្រ៊ីម័រ Bs-XpF/Bs-XpR។ រកឃើញបាក់តេរី X. euvesicatoria ចំនួន១៨ប្រភេទ ប៉ុន្តែបរាជ័យក្នុងការចាប់យក X. perforans ចំនួន១០ប្រភេទទៀត។
Morphological and Biochemical Tests
ការធ្វើតេស្តរូបសាស្ត្រ និងជីវគីមី (Morphological and Biochemical Tests)
ចំណាយតិចបំផុត និងជាមូលដ្ឋានគ្រឹះដ៏ល្អសម្រាប់ការបញ្ជាក់ថាសំណាកពិតជាស្ថិតក្នុងសន្តាន (Genus) Xanthomonas មែន។ មិនអាចធ្វើការបែងចែកប្រភេទ (Species) លម្អិតនៃបាក់តេរីទាំង៤ប្រភេទនោះបានទេ ដោយសារពួកវាមានលក្ខណៈរូបសាស្ត្រដូចគ្នា។ បញ្ជាក់ថាបាក់តេរីទាំង៣៨ប្រភេទ គឺជាសន្តាន Xanthomonas (Gram-negative, ពណ៌លឿងលើ YDC, មិនលូតលាស់លើ 5% NaCl)។

ការចំណាយលើធនធាន (Resource Cost)៖ ការអនុវត្តវិធីសាស្ត្រនេះទាមទារឱ្យមានមន្ទីរពិសោធន៍ម៉ូលេគុលបំពាក់ដោយឧបករណ៍ទំនើបៗ និងអ្នកជំនាញផ្នែកជីវព័ត៌មានវិទ្យាសម្រាប់ការវិភាគទិន្នន័យ។

៣. ការពិនិត្យសម្រាប់បរិបទកម្ពុជា/អាស៊ីអាគ្នេយ៍

ភាពលំអៀងនៃទិន្នន័យ (Data Bias)៖

ការសិក្សានេះត្រូវបានធ្វើឡើងដោយប្រើប្រាស់សំណាកពីតំបន់ភាគខាងជើង ឦសាន និងកណ្តាលនៃប្រទេសថៃ ចន្លោះឆ្នាំ១៩៨៧-២០១៨។ ដោយសារកម្ពុជាមានអាកាសធាតុត្រូពិចក្ដៅសើម និងការដាំដុះបន្លែស្រដៀងគ្នា ពូជបាក់តេរីនៅកម្ពុជាអាចមានហ្សែនស្រដៀងគ្នា ប៉ុន្តែចាំបាច់ត្រូវមានការសិក្សាដោយផ្ទាល់នៅកម្ពុជា ដើម្បីចៀសវាងការបរាជ័យក្នុងការប្រើប្រាស់ប្រ៊ីម័រ (Primers) បរទេសដែលមិនត្រូវគ្នានឹងពូជក្នុងស្រុក។

លទ្ធភាពនៃការអនុវត្ត (Applicability)៖

វិធីសាស្ត្រនិងលទ្ធផលនៃការសិក្សានេះ មានសារៈសំខាន់យ៉ាងខ្លាំងសម្រាប់ការគ្រប់គ្រងជំងឺរុក្ខជាតិ និងការត្រួតពិនិត្យភូតគាមអនាម័យ (Phytosanitary inspection) នៅប្រទេសកម្ពុជា។

ការរួមបញ្ចូលបច្ចេកទេស MLSA ជាមួយ PCR នឹងជួយស្ថាប័នស្រាវជ្រាវកម្ពុជាដោះស្រាយបញ្ហាលទ្ធផលអវិជ្ជមានមិនពិត (False negative) និងពង្រឹងគុណភាពនៃឧស្សាហកម្មគ្រាប់ពូជបន្លែក្នុងស្រុក។

៤. ផែនការសកម្មភាពសម្រាប់និស្សិត (Actionable Roadmap)

ដើម្បីអនុវត្តតាមការសិក្សានេះ និស្សិតគួរអនុវត្តតាមជំហានខាងក្រោម៖

  1. សិក្សាមូលដ្ឋានគ្រឹះនៃការបណ្ដុះ និងញែកបាក់តេរី: និស្សិតត្រូវអនុវត្តការញែកបាក់តេរី Xanthomonas ពីស្លឹករុក្ខជាតិដែលមានជំងឺ ដោយបណ្តុះលើមជ្ឈដ្ឋាន Nutrient Agar (NA) និង Yeast Dextrose Calcium Carbonate (YDC) ដើម្បីសង្កេតមើលលក្ខណៈរូបសាស្ត្រ។
  2. អនុវត្តបច្ចេកទេសស្រង់ DNA និង PCR: រៀនស្រង់ DNA ដោយប្រើប្រាស់ឈុត DNA Extraction Kits ព្រមទាំងអនុវត្តការធ្វើតេស្ត PCR ដោយសាកល្បងប្រើប្រាស់ប្រ៊ីម័រជាក់លាក់ដូចជា Bs-XeF/Bs-XeR ដើម្បីរកបាក់តេរី X. euvesicatoria
  3. រៀនប្រើប្រាស់កម្មវិធីជីវព័ត៌មានវិទ្យា (Bioinformatics): ដំឡើង និងរៀនប្រើប្រាស់កម្មវិធី MEGA 7 សម្រាប់ការតម្រៀបលំដាប់ហ្សែន (Sequence alignment) និងកម្មវិធី MrBayesFigTree ដើម្បីគូរមែកធាងប្រវត្តិវិវត្តរបស់បាក់តេរី។
  4. ប្រមូលសំណាកពីចម្ការជាក់ស្តែងនៅកម្ពុជា: ចុះប្រមូលសំណាកប៉េងប៉ោះ និងម្ទេសដែលមានរោគសញ្ញាអុចស្លឹកពីតំបន់កសិកម្មសំខាន់ៗ (ដូចជាខេត្តកណ្តាល) យកមកវិភាគរកប្រភេទ Xanthomonas ក្នុងស្រុកដើម្បីប្រៀបធៀបជាមួយទិន្នន័យ GenBank
  5. អភិវឌ្ឍន៍ប្រ៊ីម័រ (Primers) សម្រាប់ពូជក្នុងស្រុក: ដោយផ្អែកលើទិន្នន័យ MLSA ដែលទទួលបាន សូមសហការជាមួយសាស្ត្រាចារ្យដើម្បីរចនា (Design) ប្រ៊ីម័រ PCR ថ្មីដែលស័ក្តិសម និងមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ក្នុងការរកចាប់ពូជមេរោគ X. perforans ដែលមានវត្តមាននៅកម្ពុជា។

៥. វាក្យសព្ទបច្ចេកទេស (Technical Glossary)

ពាក្យបច្ចេកទេស ការពន្យល់ជាខេមរភាសា (Khmer Explanation) និយមន័យសាមញ្ញ (Simple Definition)
Multilocus Sequence Analysis (MLSA) (ការវិភាគតំណលំដាប់ហ្សែនចម្រុះ) ជាបច្ចេកទេសម៉ូលេគុលដែលគេប្រើប្រាស់ដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណ និងចំណាត់ថ្នាក់មេរោគ ដោយធ្វើការប្រៀបធៀបតំណលំដាប់នៃហ្សែនគោល (Housekeeping genes) ជាច្រើនកន្លែងក្នុងពេលតែមួយ។ វាផ្តល់ភាពជាក់លាក់ និងសុក្រឹតភាពខ្ពស់ក្នុងការបែងចែកប្រភេទ (Species) ជាងការមើលលើរូបរាងខាងក្រៅ ឬការប្រើប្រាស់ហ្សែនតែមួយកន្លែង។ ដូចជាការផ្ទៀងផ្ទាត់អត្តសញ្ញាណមនុស្សម្នាក់ដោយមើលទាំងក្រសែភ្នែក ខ្ចៅដៃ និងទម្រង់មុខព្រមៗគ្នា ជំនួសឱ្យការមើលតែស្នាមខ្ចៅដៃមួយមុខ ដើម្បីឲ្យកាន់តែច្បាស់លាស់។
Housekeeping genes (ហ្សែនគោល / ហ្សែនរក្សាមុខងារកោសិកា) ជាប្រភេទហ្សែនដែលតែងតែបញ្ចេញសកម្មភាព (Express) ជាប់ជានិច្ចនៅក្នុងកោសិកា ដើម្បីរក្សាមុខងាររស់រានមានជីវិតជាមូលដ្ឋាន (ឧទាហរណ៍ ហ្សែន gyrB, efp, dnaK)។ ដោយសារវាមានវត្តមានគ្រប់ពេល និងមិនងាយមានបម្រែបម្រួលលឿនពេក គេតែងយកវាធ្វើជាគោលសម្រាប់វិភាគប្រៀបធៀបរកពូជអម្បូររបស់បាក់តេរី។ ដូចជាគ្រឹះ ឬសសរផ្ទះដែលមិនអាចខ្វះបាន ទោះបីជាផ្ទះនោះមានម៉ូដខុសគ្នាយ៉ាងណាក៏ដោយ ក៏រចនាសម្ព័ន្ធទ្រទ្រង់នេះតែងតែមានជានិច្ចគ្រប់ផ្ទះទាំងអស់។
Polymerase chain reaction (PCR) (ប្រតិកម្មច្រវ៉ាក់ប៉ូលីមេរ៉ាស) ជាបច្ចេកទេសបន្ទប់ពិសោធន៍ដែលប្រើដើម្បីបង្កើតច្បាប់ចម្លងនៃបំណែក DNA ជាក់លាក់ណាមួយរបស់មេរោគពីចំនួនតិចតួច ឱ្យទៅជាចំនួនរាប់លានច្បាប់ចម្លង ក្នុងរយៈពេលខ្លី។ ការធ្វើបែបនេះជួយឱ្យអ្នកវិទ្យាសាស្ត្រអាចមើលឃើញ និងវិភាគបានថា តើសំណាកនោះពិតជាមានផ្ទុក DNA របស់មេរោគដែលគេកំពុងស្វែងរក ឬយ៉ាងណា។ ដូចជាការយកអត្ថបទមួយវគ្គតូចចេញពីសៀវភៅក្រាស់មួយ ហើយយកទៅថតចម្លង (Copy) រាប់លានសន្លឹក ដើម្បីចែកឱ្យគេមើលឃើញគ្រប់ៗគ្នាដោយងាយស្រួល។
Pathogenicity test (ការធ្វើតេស្តសមត្ថភាពបង្កជំងឺ) ជាការពិសោធន៍ដោយយកមេរោគដែលញែកបានពីទីវាល (Isolates) ទៅចាក់បញ្ចូល ឬលាបលើរុក្ខជាតិសាកល្បងដែលមានសុខភាពល្អ ក្នុងលក្ខខណ្ឌគ្រប់គ្រងបាន ដើម្បីតាមដាន និងបញ្ជាក់ថាតើមេរោគនោះពិតជាភ្នាក់ងារបង្កជំងឺ និងអាចបង្កើតឱ្យមានរោគសញ្ញាដូចដើមប្រាកដមែនឬយ៉ាងណា (យោងតាមគោលការណ៍ Koch's postulates)។ ដូចជាការយកជនសង្ស័យទៅធ្វើត្រាប់តាមសកម្មភាពបទល្មើសឡើងវិញនៅកន្លែងកើតហេតុ ដើម្បីបញ្ជាក់ថាគេពិតជាអ្នកប្រព្រឹត្តមែន។
Phylogenetic tree (មែកធាងប្រវត្តិវិវត្ត) ជាគំនូរបំព្រួញរាងដូចមែកធាង ដែលបង្ហាញពីទំនាក់ទំនងញាតិសន្តាន និងប្រវត្តិវិវត្តន៍រវាងប្រភេទជីវិតផ្សេងៗគ្នា (ដូចជាពូជបាក់តេរី Xanthomonas ផ្សេងៗ) ដោយផ្អែកលើភាពស្រដៀងគ្នានៃហ្សែនរបស់ពួកវា។ មេរោគដែលមានហ្សែនស្រដៀងគ្នាខ្លាំង នឹងស្ថិតនៅលើមែកតែមួយ ឬនៅក្បែរគ្នាបំផុត។ ដូចជាតារាងមែកធាងគ្រួសារ (Family tree) ដែលបង្ហាញថាអ្នកណាជាបងប្អូនបង្កើត អ្នកណាជាបងប្អូនជីដូនមួយ ដោយផ្អែកលើខ្សែស្រឡាយដូនតា។
Type strain (ស្ត្រេនអត្តសញ្ញាណគោល / សំណាកបាក់តេរីគោល) ជាសំណាកបាក់តេរីដើមដំបូងគេបំផុតដែលត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណ ដាក់ឈ្មោះ និងរក្សាទុកជាផ្លូវការនៅក្នុងធនាគារមេរោគអន្តរជាតិ។ គេប្រើប្រាស់វាជាស្តង់ដារគោលសម្រាប់យកមេរោគផ្សេងៗដែលរកឃើញថ្មី មកប្រៀបធៀបដើម្បីបញ្ជាក់ថាវាពិតជាប្រភេទ (Species) តែមួយឬក៏អត់។ ដូចជាគីឡូក្រាមស្តង់ដារអន្តរជាតិដែលគេរក្សាទុកនៅទីក្រុងប៉ារីស ដែលគេយកធ្វើជាគោលសម្រាប់ថ្លឹងផ្ទៀងផ្ទាត់ភាពត្រឹមត្រូវនៃជញ្ជីងទាំងអស់នៅលើពិភពលោក។

៦. ប្រធានបទពាក់ព័ន្ធ (Further Reading)

អត្ថបទដែលបានបោះពុម្ពនៅលើ KhmerResearch ដែលទាក់ទងនឹងប្រធានបទនេះ៖

ប្រធានបទ និងសំណួរស្រាវជ្រាវដែលទាក់ទងនឹងឯកសារនេះ ដែលអ្នកអាចស្វែងរកបន្ថែម៖