Original Title: Intraspecific Hybridization Between Color Mutants of Trichoderma harzianum by Protoplast Fusion
Source: li01.tci-thaijo.org
Disclaimer: Summary generated by AI based on the provided document. Please refer to the original paper for full scientific accuracy.

ការបង្កាត់ពូជអន្តរប្រភេទរវាងមូយតង់ពណ៌នៃផ្សិត Trichoderma harzianum តាមរយៈការរំលាយបញ្ចូលគ្នានូវប្រូតូប្លាស

ចំណងជើងដើម៖ Intraspecific Hybridization Between Color Mutants of Trichoderma harzianum by Protoplast Fusion

អ្នកនិពន្ធ៖ Chiradej Chamswarng, Dept. of Plant Pathology, Faculty of Agriculture, Kasetsart University, Kihashiro Ogawa, Dept. of Biological Resource Sciences, Faculty of Agriculture, Miyazaki University, Wanwilai Gesnara, Plant Pest Clinic and Quarantine Laboratory Unit, Kasetsart University, Nuanwan Faroongsang, Plant Pest Clinic and Quarantine Laboratory Unit, Kasetsart University

ឆ្នាំបោះពុម្ព៖ 1993, Kasetsart J. (Nat. Sci.)

វិស័យសិក្សា៖ Plant Pathology / Fungal Genetics

១. សេចក្តីសង្ខេបប្រតិបត្តិ (Executive Summary)

បញ្ហា (The Problem)៖ ផ្សិត Trichoderma harzianum គឺជាភ្នាក់ងារត្រួតពិនិត្យជីវសាស្ត្រដ៏មានសក្តានុពលប្រឆាំងនឹងមេរោគផ្សិតក្នុងដី ប៉ុន្តែការកែលម្អពូជផ្សិតនេះជួបការលំបាកដោយសារកង្វះដំណាក់កាលបន្តពូជតាមភេទ។ ការសិក្សានេះមានគោលបំណងអភិវឌ្ឍបច្ចេកទេសដើម្បីរកឱ្យឃើញនូវការរលាយបញ្ចូលគ្នាដោយជោគជ័យនៃប្រូតូប្លាសរបស់ផ្សិតនេះដោយប្រើប្រាស់មូយតង់ពណ៌ (Color mutants)។

វិធីសាស្ត្រ (The Methodology)៖ ការស្រាវជ្រាវនេះបានប្រើប្រាស់ប្រព័ន្ធអង់ស៊ីមរំលាយដើម្បីបំបែកប្រូតូប្លាស និងប្រើប្រាស់សារធាតុគីមីដើម្បីជំរុញការរលាយបញ្ចូលគ្នារវាងមូយតង់ពណ៌ដែលបានមកពីការបាញ់កាំរស្មីយូវី។

លទ្ធផលសំខាន់ៗ (The Verdict)៖

២. ការវិភាគលើប្រសិទ្ធភាព និងដែនកំណត់ (Performance & Constraints)

វិធីសាស្ត្រ (Method) គុណសម្បត្តិ (Pros) គុណវិបត្តិ (Cons) លទ្ធផលគន្លឹះ (Key Result)
Protoplast Fusion (PEG-mediated)
ការរលាយបញ្ចូលគ្នានៃប្រូតូប្លាស (ដោយប្រើសារធាតុគីមី PEG)
អនុញ្ញាតឱ្យមានការផ្សំសែនឡើងវិញ (Genetic recombination) និងបង្កើតពូជកូនកាត់មានស្ថិរភាព បើទោះជាផ្សិតប្រភេទនេះគ្មានដំណាក់កាលបន្តពូជតាមភេទក៏ដោយ។ ត្រូវការអង់ស៊ីមដែលមានតម្លៃថ្លៃសម្រាប់ការបំបែកកោសិកា និងទាមទារភាពសុក្រឹតខ្ពស់ក្នុងការគ្រប់គ្រងកំហាប់អូស្មូស (Osmotic pressure)។ ទទួលបានអត្រានៃការរលាយបញ្ចូលគ្នា ២% ដោយបង្កើតបានជាកូឡូនីកូនកាត់ឌីប្លូអ៊ីតពណ៌បៃតងយ៉ាងជោគជ័យ។
Conventional Selection / Mutation
ការធ្វើមូយតាស៊ីយ៉ុង ឬការជ្រើសរើសពូជតាមបែបប្រពៃណី
មានភាពងាយស្រួលក្នុងការអនុវត្ត និងមិនសូវចំណាយច្រើនលើសារធាតុគីមី ឬបរិក្ខារពិសោធន៍ស្មុគស្មាញ។ ឱកាសនៃការទទួលបានពូជដែលមានសមត្ថភាពខ្ពស់មានកម្រិតទាប ដោយសារគ្មានការផ្លាស់ប្តូរ និងរួមបញ្ចូលគ្នានូវសែន (Genes) ពីពូជផ្សេងគ្នា។ ត្រូវបានប្រើប្រាស់ដើម្បីបង្កើតមូយតង់ពណ៌ (ស និងលឿង) ប៉ុន្តែមិនអាចបង្កើតពូជផ្សិតកូនកាត់ថ្មីដូចបច្ចេកទេសរលាយប្រូតូប្លាសឡើយ។

ការចំណាយលើធនធាន (Resource Cost)៖ ការសិក្សានេះទាមទារបរិក្ខារមន្ទីរពិសោធន៍មីក្រូជីវសាស្ត្រកម្រិតខ្ពស់ និងការប្រើប្រាស់អង់ស៊ីមនិងសារធាតុគីមីជាក់លាក់ដែលមានតម្លៃខ្ពស់។

៣. ការពិនិត្យសម្រាប់បរិបទកម្ពុជា/អាស៊ីអាគ្នេយ៍

ភាពលំអៀងនៃទិន្នន័យ (Data Bias)៖

ការសិក្សានេះត្រូវបានធ្វើឡើងនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍នៃប្រទេសថៃ និងជប៉ុន ដោយប្រើប្រាស់ពូជផ្សិត Trichoderma harzianum (CB-Pin-01) ដែលមានប្រភពចេញពីមន្ទីរពិសោធន៍ផ្ទាល់។ ទិន្នន័យនេះអាចមានភាពលំអៀងទៅនឹងលក្ខខណ្ឌបរិស្ថាននៅទីនោះ ហេតុនេះសម្រាប់កម្ពុជា ការទាញយកពូជផ្សិតក្នុងស្រុកមកធ្វើការពិសោធន៍គឺជារឿងចាំបាច់បំផុត ដើម្បីធានាថាពួកវាអាចបន្ស៊ាំនឹងអាកាសធាតុ និងប្រភេទដីនៅក្នុងប្រទេសកម្ពុជា។

លទ្ធភាពនៃការអនុវត្ត (Applicability)៖

បច្ចេកទេសរលាយប្រូតូប្លាសនេះមានអត្ថប្រយោជន៍ខ្លាំងណាស់សម្រាប់វិស័យកសិកម្មនៅកម្ពុជា ក្នុងការបង្កើតភ្នាក់ងារត្រួតពិនិត្យជីវសាស្ត្រ (Biocontrol agents) ដ៏មានប្រសិទ្ធភាព។

ការស្ទាត់ជំនាញលើបច្ចេកទេសកែច្នៃហ្សែនផ្សិតនេះ នឹងជួយកម្ពុជាផលិតជីជីវសាស្ត្រក្នុងស្រុកដែលមានគុណភាពខ្ពស់ កាត់បន្ថយការនាំចូល និងលើកកម្ពស់សុវត្ថិភាពចំណីអាហារ។

៤. ផែនការសកម្មភាពសម្រាប់និស្សិត (Actionable Roadmap)

ដើម្បីអនុវត្តតាមការសិក្សានេះ និស្សិតគួរអនុវត្តតាមជំហានខាងក្រោម៖

  1. សិក្សាមូលដ្ឋានគ្រឹះ និងប្រមូលពូជផ្សិតក្នុងស្រុក: ចាប់ផ្តើមដោយការរើសយកពូជផ្សិត Trichoderma harzianum ពីដីកសិកម្មក្នុងប្រទេសកម្ពុជា និងបណ្តុះវានៅលើមជ្ឈដ្ឋាន Potato Dextrose Agar (PDA)
  2. ការបង្កើតមូយតង់ពណ៌ (Color Mutants): ប្រើប្រាស់អំពូល UV-irradiation ដើម្បីបាញ់លើកូនផ្សិត (Conidia) ក្នុងរយៈពេលកំណត់ណាមួយ ដើម្បីបង្កើតមូយតង់ពណ៌ស និងពណ៌លឿង សម្រាប់ធ្វើជាសញ្ញាសម្គាល់កោសិកា។
  3. ការបំបែក និងរំលាយប្រូតូប្លាស: ប្រើប្រាស់ល្បាយអង់ស៊ីមដូចជា Zymolyase និង Funcelase ដើម្បីបំបែកជញ្ជាំងកោសិកា រួចប្រើប្រាស់សូលុយស្យុង 35% PEG 6,000 ដើម្បីជំរុញការរលាយបញ្ចូលគ្នានៃប្រូតូប្លាសទាំងពីរប្រភេទ។
  4. ការបណ្តុះកោសិកា និងជម្រុះយកកូនកាត់ឌីប្លូអ៊ីត: បណ្តុះប្រូតូប្លាសដែលរលាយចូលគ្នានៅលើមជ្ឈដ្ឋានអប្បបរមា (Minimal Medium) ដោយបន្ថែមសារធាតុ 0.1% d-camphor ដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណកូនកាត់ដែលជោគជ័យ។
  5. ការធ្វើតេស្តប្រសិទ្ធភាពក្នុងផ្ទះកញ្ចក់ និងទីវាល: សាកល្បងសមត្ថភាពរបស់កូនកាត់ថ្មីក្នុងការទប់ស្កាត់ជំងឺរុក្ខជាតិ (ដូចជារលួយគល់) នៅក្នុងផ្ទះកញ្ចក់ (Greenhouse) មុននឹងយកទៅអនុវត្តផ្ទាល់លើដំណាំកសិកម្មពិតប្រាកដ។

៥. វាក្យសព្ទបច្ចេកទេស (Technical Glossary)

ពាក្យបច្ចេកទេស ការពន្យល់ជាខេមរភាសា (Khmer Explanation) និយមន័យសាមញ្ញ (Simple Definition)
Protoplast fusion (ការរលាយបញ្ចូលគ្នានៃប្រូតូប្លាស) ដំណើរការបច្ចេកទេសដែលគេយកកោសិកាពីរដែលត្រូវបានបកជញ្ជាំងកោសិកាចេញ (ប្រូតូប្លាស) មកបញ្ចួលគ្នាឱ្យក្លាយជាកោសិកាតែមួយ ដើម្បីបង្កាត់ពូជ និងផ្លាស់ប្តូរព័ត៌មានសេនេទិច ជាពិសេសសម្រាប់ផ្សិតដែលមិនបន្តពូជតាមភេទ។ ដូចជាការយកពពុះសាប៊ូពីរមកបំប៉ះគ្នាឱ្យរលាយចូលគ្នាជាពពុះតែមួយធំ។
Biocontrol agent (ភ្នាក់ងារត្រួតពិនិត្យជីវសាស្ត្រ) ការប្រើប្រាស់សារពាង្គកាយមានជីវិត (ដូចជាផ្សិត Trichoderma ឬបាក់តេរី) ដើម្បីទប់ស្កាត់ ឬសម្លាប់មេរោគផ្សិតផ្សេងទៀត និងសត្វល្អិតដែលបំផ្លាញដំណាំ ក្នុងគោលបំណងកាត់បន្ថយការប្រើប្រាស់ថ្នាំគីមី។ ដូចជាការចិញ្ចឹមឆ្មាដើម្បីចាប់កណ្តុរក្នុងផ្ទះ ជាជាងការប្រើថ្នាំបំពុលកណ្តុរ។
Heterozygous diploid (កូនកាត់ឌីប្លូអ៊ីត) ស្ថានភាពនៃកោសិកាដែលមានផ្ទុកសំណុំក្រូម៉ូសូមចំនួនពីរខុសៗគ្នា ដែលទទួលបានពីកោសិកាមេបាទាំងពីរ (ក្នុងទីនេះគឺពីមូយតង់ពណ៌ស និងពណ៌លឿង) ធ្វើឱ្យវាក្លាយជាកូនកាត់ដែលមានលក្ខណៈថ្មី និងមានស្ថិរភាព។ ដូចជាការលាយថ្នាំពណ៌សនិងពណ៌លឿងចូលគ្នា ដើម្បីបង្កើតបានជាថ្នាំពណ៌បៃតងថ្មីមួយ។
Lytic enzyme system (ប្រព័ន្ធអង់ស៊ីមរំលាយ) បណ្តុំនៃអង់ស៊ីម (ដូចជា Zymolyase និង Chitinase) ដែលត្រូវបានប្រើប្រាស់សម្រាប់រំលាយជញ្ជាំងកោសិការបស់ផ្សិតដ៏រឹងមាំ ដើម្បីប្រមូលយកតែផ្នែកខាងក្នុងកោសិកា (ប្រូតូប្លាស) មកធ្វើការពិសោធន៍បង្កាត់។ ដូចជាការប្រើប្រាស់កន្ត្រៃ ឬឧបករណ៍កាត់សំបក ដើម្បីបកសំបកក្រូចដ៏រឹងយកតែសាច់ខាងក្នុង។
Osmotic stabilizer (សារធាតុរក្សាលំនឹងអូស្មូស) សារធាតុសូលុយស្យុង (ដូចជាអំបិល NaCl ឬជាតិស្ករ) ដែលជួយរក្សាសម្ពាធទឹកទាំងខាងក្នុង និងខាងក្រៅកោសិកា ដើម្បីការពារកុំឱ្យប្រូតូប្លាសដែលគ្មានជញ្ជាំងកោសិកាការពារនោះ ត្រូវផ្ទុះបែក ឬស្វិតស្លាប់។ ដូចជាការរក្សាប៉េងប៉ោងទឹកនៅក្នុងអាងទឹក ដើម្បីកុំឱ្យវាបែកដោយសារសម្ពាធខ្យល់ខាងក្រៅ។
Mutants (មូយតង់ / សារពាង្គកាយបំប្លែងសែន) សារពាង្គកាយដែលមានការប្រែប្រួលសែន (DNA) ខុសពីធម្មជាតិ ដោយសារការរងឥទ្ធិពលពីកាំរស្មីយូវី ឬសារធាតុគីមី ដែលធ្វើឱ្យពួកវាមានលក្ខណៈរូបខុសប្លែកពីពូជដើម (ឧទាហរណ៍ ផ្សិតប្តូរពណ៌ពីបៃតង ទៅស ឬលឿង)។ ដូចជារថយន្តដែលត្រូវបានគេកែច្នៃម៉ាស៊ីន និងប្តូរពណ៌ខុសពីរថយន្តដើមចេញពីរោងចក្រ។
Diploidization (ការធ្វើឌីប្លូអ៊ីតកម្ម) ដំណើរការនៃការជំរុញឱ្យកោសិកាដែលទើបតែរលាយបញ្ចូលគ្នា (ដែលមានណ្វៃយ៉ូពីរនៅឡែកពីគ្នា) រួមបញ្ចូលណ្វៃយ៉ូទាំងពីរនោះចូលគ្នាបង្កើតបានជាកោសិកាតែមួយដែលមានសំណុំក្រូម៉ូសូមទ្វេដង (Diploid) និងមានលក្ខណៈសេនេទិចថ្មីមួយ។ ដូចជាការយកក្រុមហ៊ុនពីរដែលមានថៅកែពីរនាក់មករួមបញ្ចូលគ្នា ហើយបង្កើតជានាយកប្រតិបត្តិតែមួយដើម្បីដឹកនាំក្រុមហ៊ុនថ្មីនោះ។

៦. ប្រធានបទពាក់ព័ន្ធ (Further Reading)

អត្ថបទដែលបានបោះពុម្ពនៅលើ KhmerResearch ដែលទាក់ទងនឹងប្រធានបទនេះ៖

ប្រធានបទ និងសំណួរស្រាវជ្រាវដែលទាក់ទងនឹងឯកសារនេះ ដែលអ្នកអាចស្វែងរកបន្ថែម៖